3 概述
鹼性磷酸酶(ALP))屬磷酸單酯水解酶,是一組特異的磷酸酯酶。該酶廣泛分佈於人體組織和體液,以骨、肝、乳腺、小腸、腎中含量較高,其大部分由骨細胞產生,小部分來自肝,經膽汁排入腸道。ALP測定方法主要是比色法和連續監測法。
4 血清鹼性磷酸酶的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 血清鹼性磷酸酶的測定原理
(1)比色法:ALP在鹼性條件下使磷酸苯二鈉水解,生成磷酸和遊離酚,後者與4-氨基安替比林作用,並經鐵氰化鉀氧化成紅色醌類化合物,其顏色的深淺與ALP活性成正比。
(2)連續監測法:ALP在鹼性條件下,使磷酸對硝基苯酚(4-NPP)釋放出磷酸基團,AMP參與磷酸酰基的轉移,促進酶反應速率,生成遊離的對硝基苯酚(4-NP),並形成黃色的醌,其吸光度的增高速率與酶活力成正比。
4.5 試劑
(1)比色法:
①0.1mol/L碳酸鹽緩衝液(pH10.0):稱取無水碳酸鈉6.36g,碳酸氫鈉3.36g,4-氨基安替比林1.5g,溶於800ml蒸餾水中,移入1000ml容量瓶內,加蒸餾水至刻度,置棕色瓶內保存。
②20mmol/L磷酸苯二鈉溶液:稱取磷酸苯二鈉(AR)2.18g,迅速加入已煮沸的500ml蒸餾水中,冷卻後加入氯仿2ml防腐,冰箱保存。此爲基質液。
③鐵氰化鉀溶液:稱取鐵氰化鉀2.5g,硼酸17g,分別溶於400ml蒸餾水中,混合後加水至1000ml,置棕色瓶內避光保存。出現藍綠色應棄去。
④酚標準貯存液(1mg/ml):稱取重蒸餾酚1.0g,溶於0.1mol/L鹽酸中,並加至1000ml刻度。也可購買標準液。
⑤酚標準應用液(0.05mg/ml):取酚標準貯存液5ml,加蒸餾水至100ml。
(2)連續監測法:
①1.8mol/L AMP緩衝液(pH10.3):稱取2-氨基-2甲基-1-丙醇(AMP,MW89.14)160g,加1mol/L鹽酸320ml混合,加500ml新煮沸已涼的蒸餾水,調pH至10.3±0.02(30℃),並加上述蒸餾水至1000ml,置緊塞瓶中於冰箱保存。
②10.5mmol/L氯化鎂溶液:稱取氯化鎂(MgCl2·6H2O,MW20 3.31)0.21g,溶於水中,並稀釋至100ml,室溫保存。
③31.5mmol/L磷酸對硝基苯酚溶液(4-NPP):稱磷酸對硝基苯酚二鈉鹽(含6分子水,MW 371.15)120.8mg,溶於100ml蒸餾水中,置棕色瓶內於冰箱保存。
④底物緩衝液(0.84mol/L AMP,15mmol/L 4-NPP,0.5mmol/L MgCl2,pH10.3)將AMP、4-NPP和MgCl23種溶液按10∶10∶1混合,37℃預溫待用。
4.6 操作方法
(1)比色法:按表1操作。
充分混勻,在510nm處,以蒸餾水調零,記錄各管吸光度,以測定管與對照管吸光度差值,查標準曲線。
(2)連續監測法:各實驗室可根據分析儀型號及操作介紹而定,主要參數:溫育時間30s,連續監測時間60s,波長405nm,吸液量500μl,溫度37℃,標本與試劑體積之比1∶50,係數2757。
4.7 正常值
(1)比色法:
成人:3~13金氏單位;
兒童:5~28金氏單位。
(2)連續監測法:
37℃,女性1~12歲<500U/L;>15歲40~150U/L。
男性1~12歲<500U/L;12~15歲<750U/L;>25歲40~150U/L。
4.8 化驗結果臨牀意義
血清ALP測定主要用於肝膽系統和骨骼疾病的診斷,尤其對黃疸類型的鑑別更具有參考價值。
(1)阻塞性黃疸:肝內、外阻塞性黃疸患者因膽汁排泄不暢,ALP滯留於血中而增高,其增高的程度與梗阻的程度、持續的時間呈正比。以肝外阻塞>肝內阻塞,完全阻塞>不完全阻塞,惡性腫瘤>膽石症。
(2)伴有黃疸的急、慢性肝炎,肝硬化,肝壞死等:ALP活性也增高。一般認爲,肝細胞性黃疸患者ALP持續低水平升高,若膽紅素逐漸升高,而ALP降低,提示肝細胞嚴重受損。反之,則說明肝細胞逐漸恢復。嚴重瀰漫性肝損傷時,ALP活性降低。
(3)肝癌:約半數原發性肝癌和90%轉移性肝癌ALP升高,在肝病中升高最爲顯著。無黃疸患者ALP異常升高應警惕肝癌之可能。其他腫瘤ALP亦可升高。
(4)骨骼系統疾病:骨軟化症、佝僂病、骨折恢復期等,因ALP生成亢進,使ALP活性升高。
(5)ALP活性降低:常見於克汀病、維生素C缺乏缺乏症、磷酸酶過少症。偶見於甲狀腺功能減退、惡性貧血和營養不良。
4.9 附註
(1)比色法:
①基質液中不應含遊離酚,如空白管顯紅色,則說明磷酸苯二鈉已分解,應重新配製。
②鐵氰化鉀應避光保存,顯藍色則失效。加入後應迅速混勻,以充分顯色。
(2)連續監測法:
①應空腹採血。高脂飲食可使小腸合成ALP增高,高糖飲食也可使酶活力升高,高蛋白飲食則使酶活力降低。
②血清和肝素抗凝血漿結果一致。溶血標本酶活力下降,凡可絡合酶的抗凝劑均可抑制酶活性。
③溫度可影響測定結果。室溫及冰箱貯存血清均可使酶活性升高,置1~4天,酶活性增高3%~6%,冰凍血清則酶活性降低,復溫後則恢復,故標本最好新鮮,及時測定。
④緩衝液種類及試劑純度均可影響測定結果。緩衝液種類不同,其參考區間差別較大。用作摩爾吸光係數校正的標準物——對硝基苯酚和作底物用的磷酸對硝基苯酚必須達一定規格。