3 亮氨酸氨基肽酶的醫學檢查
3.1 檢查名稱
3.2 分類
3.3 亮氨酸氨基肽酶的測定原理
(1)二甲氨基苯甲醛顯色法:樣品中的亮氨酸氨基肽酶作用於L-亮氨酸-β-萘胺,水解產物β-萘胺與二甲氨基苯甲醛反應形成偶氮化合物,根據β-萘胺的生成量推算此酶的活性。
(2)連續監測法:樣品中的酶水解亮氨酸對硝基苯胺,可在405nm處取得吸光度,根據其摩爾吸光係數和吸光度再求得此酶活力單位。
3.4 試劑
①基質緩衝液(pH6.5):稱取磷酸二氫鉀0.681g,溶於40ml蒸餾水中,加入L-亮氨酸-β萘胺40mg,溶解後再加MgCl2100mg,用1mol/L NaOH調pH至6.5(約1.5ml),加蒸餾水至50ml,冰箱可保存4周。
②40g/L對位二甲氨基苯甲醛乙醇溶液:稱對位二甲氨基苯甲醛8g溶於70%乙醇中,最後用70%乙醇加至200ml。
③顯色劑:按需要取40g/L對位二甲氨基苯甲醛乙醇液若干ml,再加等量0.45mol/L HCl,置棕色瓶室溫保存約兩週。
④β-萘胺標準液(150μmol/L):準確稱取β-苯胺鹽酸鹽(AR)13.5mg,溶於蒸餾水中,然後加至1L(臨用前配製)。
(2)連續監測法:
①20mmol/L磷酸鹽緩衝液(pH7.2):稱取磷酸氫二鈉2.04g和磷酸二氫鉀0.77g溶於800ml蒸餾水中,用1mol/L NaOH或1mol/L HCl調pH至7.2,最後加蒸餾水至1L。冰箱可保存1年。
②基質溶液:稱取亮氨酸對硝基苯胺63mg於甲醇10ml中。置棕色瓶內。冰箱中能保存六個月。
3.5 操作方法
用445nm波長,以對照管調零,讀取測定管吸光度,查標準曲線即可求取酶活力單位。
(2)連續監測法:在一光徑1cm比色杯中加入3.0ml pH7.2磷酸鹽緩衝液,加入基質溶液0.1ml,再加預溫至30℃血清0.1ml,混勻,立即輸入儀器,於405nm處連續測吸光度,求△A/min。
3.6 正常值
(3)酶速率法(37℃): 血清:男:18.3~36.7U/L 女:16.3~29.2U/L 尿: 男:3.84~9.24U/g?Cr 女:2.82~5.3U/g?Cr
3.7 化驗結果臨牀意義
升高:膽管癌、胰腺癌、或者膽結石等引起肝外性阻塞、藥物性肝損害、病毒性肝炎、肝內膽汁瘀滯、急性肝炎、惡性淋巴瘤、淋巴肉瘤、妊娠、無黃疸的肝轉移癌等。
此酶廣泛分佈於人體各組織,以肝、胰、膽、腎、小腸以及子宮肌層內含量最多。胰腺癌時此酶活力升高,陽性率達100%,此酶活力正常時可否定胰腺癌,但肝膽疾病時此酶活力也可升高。因此該酶臨牀應用價值相似於ALP,但骨癌時此酶活力正常。
此外,正常妊娠2個月後該酶活力逐漸上升至分娩後下降,在判定結果時應注意此點。
3.8 附註
(2)由本法所得Km爲8.8×10-2mmol/L,本法酶反應液中底物濃度爲1.28mmol/L,約爲Km值的15倍。