寨卡病毒實驗室檢測技術方案

實驗室檢測 寨卡病毒病

心氣虛,則脈細;肺氣虛,則皮寒;肝氣虛,則氣少;腎氣虛,則泄利前後;脾氣虛,則飲食不入。
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1 拼音

zhài kǎ bìng dú shí yàn shì jiǎn cè jì shù fāng àn

2 概述

寨卡病毒(Zika Virus)屬黃病毒科(Flaviviridae)黃病毒屬(Flavivirus),呈球形,直徑約爲40-70nm,有包膜。基因組爲單股正鏈RNA,長度約爲10.8Kb,可分爲亞洲型和非洲型兩個基因型

寨卡病毒病檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測病毒分離等。寨卡病毒黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學交叉反應,目前主要採用病毒核酸檢測

3 檢測對象

疑似和臨牀診斷病例。

伊蚊成蚊和幼蟲

4 樣本採集、保存和運輸

4.1 病例標本採集。

對懷疑感染寨卡病毒患者,推薦採集血清標本開展檢測

無菌真空乾燥管,採集患者非抗凝血5mL,及時分離血清,分裝2管,保存於帶螺旋蓋、內有墊圈的凍存管內,標記清楚後低溫保存,其中1管用於現場實驗室檢測,1管用於上級疾病預防控制機構複覈。

對病例應儘可能採集雙份血液標本,兩份標本之間相隔14天爲宜,住院病例可於入院當天和出院前1天各採集一份。

4.2 蚊媒標本採集。

疫點內採集的伊蚊成蚊及幼蟲分類鑑定後,填寫媒介標本採集信息表,按照採集地點分裝,每管10-20只。

4.3 標本保存、運送。

標本能夠在24小時內開展實驗室檢測,應將標本置於2-8℃保存;如能在7天內開展檢測,應將樣本置於-20℃保存;如需保存7天以上,應將樣本置於-70℃以下。

標本運送時採用低溫冷藏運輸,避免凍融,樣本運輸應遵守國家關於三類病原體相關生物安全規定

5 檢測方法

寨卡病毒病檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測病毒分離等。寨卡病毒黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學交叉反應,目前主要採用病毒核酸檢測

開展蚊媒寨卡病毒檢測時,對捕獲的伊蚊成蚊或幼蟲進行病毒核酸檢測

開展寨卡病毒實驗室檢測時,應同時考慮登革病毒基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒基孔肯雅病毒實驗室檢測應按照相應的技術指南開展。

5.1 臨牀標本檢測

5.1.1 病原學檢測

病原學檢測主要適用於急性期血液標本,一般認爲發病7天內檢測陽性率高。

(1)核酸檢測:採用熒光定量RT-PCR方法,是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。

(2)病毒分離:將標本接種於蚊源細胞(C6/36)或哺乳動物細胞(BHK21、Vero)進行分離培養,出現病變以後,用檢測核酸方法鑑定病毒。也可使用乳鼠腦內接種進行病毒分離

5.1.2 血清檢測

(1)血清特異性IgM抗體:發病3天后可檢出病毒特異性IgM抗體,但發病7天后檢出率高。可採用ELISA、免疫熒光方法檢測。IgM抗體陽性,提示患者可能新近感染寨卡病毒,但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒黃熱病毒和西尼羅病毒黃病毒有較強的交叉反應,易於產生假陽性

(2)中和抗體:採用空斑減少中和試驗方檢測患者恢復期血清中和抗體陽轉或滴度較急性期呈4倍及以上升高,且排除登革、乙腦等其他常見黃病感染,可以確診。

5.2 媒介標本檢測

5.2.1 標本處理

分類後的伊蚊成蚊或幼蟲,按照採集地點,每10~20只爲一份進行研磨處理。

5.2.2 病毒核酸檢測

RT-PCR方法進行寨卡病毒核酸檢測

5.2.3 病毒分離

病毒核酸陽性標本進行病毒分離

6 生物安全

寨卡病毒在我國歸屬於三類病原體,應在生物安全二級實驗室(BSL-2)開展實驗室檢測。應按照《病原微生物實驗室生物安全管理條例》等相關規定要求,做好生物安全防護工作。

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