3 概述
HBV感染和免疫注射HBV疫苗都可產生乙型肝炎表面抗體(HBsAb)。HBsAb有IgM和IgG兩型,前者發生在感染早期,後者發生稍後,它是一種保護性抗體,有良好的中和作用,並能在血清中長期存在。抗HBs是HBV感染後主要的保護性抗體,一般出現於HBsAg消失後,在乙肝恢復期緩慢上升,可持續多年。抗HBs陽性表示急性乙肝或隱性感染已經恢復,並具有對HBV的免疫力,注射乙肝疫苗後,血清中出現抗HBs是免疫成功的標誌。
5 乙型肝炎表面抗體的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 取材
5.4 乙型肝炎表面抗體的測定原理
採用純化HBsAg包被反應板,加入待測標本,同時加入HBsAg-HRP,當標本存在抗-HBS時,該抗-HBS與包被HBsAg結合並與酶結合物形成HBsAg-抗HBS-HBsAg-HRP複合物,加入TMB底物產生顯色反應,反之則無顯色反應。
5.5 試劑
0.05mol/L碳酸鹽緩衝液,pH9.6(Na2CO30.16g、NaHCO30.29g,NaN30.02g,加蒸餾水至1000ml,4℃保存);0.05mol/L PBS-Tween20緩衝液,pH7.4(NaCl 8g,KH2PO40.2g,NaH2PO4·12H2O 2.9g,KCl 0.2g,Tween20 0.5ml,加蒸餾水至1000ml);0.02mol/L Tris-HCl-Tween 20緩衝液,pH7.4(Tris 2.42g,1mol/L HCl 3ml,Tween 0.5ml,加蒸餾水至1000ml)。抗HBs·IgG(包被用),辣根過氧化酶標記抗HBs(抗HBs·HRP)和底物(鄰苯二胺)隨藥盒配備或自購。
5.6 操作方法
(1)取用碳酸鹽緩衝液作適當稀釋的抗HBs·IgG(用抗HBs血清自提或隨藥盒配備)包被聚苯乙烯反應板,每孔加0.1ml(最後1孔不加,作爲空白)。加蓋,放4℃ 24h。次日用Tris-HCl-Tween20緩衝液洗滌3次,最後將板倒置於吸水紙上,使各孔液體流盡。
(2)各孔加入待測血清0.1ml(觀察滴度可作不同稀釋)。每板同時做陽性血清和陰性血清對照。加蓋,置37℃ 2h後移去各孔液體,如上法洗滌3次。
(3)各孔加入底物溶液(0.1mol/L Na2HPO45.14ml,0.05mol/L枸櫞酸4.86ml,鄰苯二胺4mg,3%H2O20.05ml,避光,臨用時配製)0.1ml,置室溫暗處15~30min。待陽性對照孔充分顯色後,各孔加入2mol/L H2SO40.05ml終止反應。
5.7 正常值
5.8 化驗結果臨牀意義
抗HBs是HBV感染後主要的保護性抗體,一般出現於HBsAg消失後,在乙肝恢復期緩慢上升,可持續多年。抗HBs陽性表示急性乙肝或隱性感染已經恢復,並具有對HBV的免疫力,注射乙肝疫苗後,血清中出現抗HBs是免疫成功的標誌。
(3)篩選抗-HBs陽性血源,製備高滴度抗乙型肝炎免疫球蛋白。
5.9 附註
(1)試劑使用前應搖勻,並棄去l~2滴後垂直滴加,注意均勻用力。