2 製備方法
從全血或壓積紅細胞內去除白細胞的方法較多,其去除效果各不相同,但任何一種方法都不可能把白細胞全部除去。一般認爲去除70%以上即可避免因白細胞凝集所致的發熱反應。
2.1 離心法
是一種簡單而較爲有效的製備方法。
(1) 正位離心法:①用三聯塑料袋採集全血。②以1160g離心8min,溫度控制在20℃。③分出上層血漿至2號轉移袋內。④擠出白膜層及靠近白膜層1.0-1.5cm厚的紅細胞至1號轉移袋內。⑤爲提高白細胞除去率,可再將2號轉移袋內的血漿返回血袋。⑥充分混勻後重復步驟②~④。⑦以原血漿配製成70%比容的去白細胞的紅細胞。
(2)倒置離心法:①用特製三聯塑料袋採集全血。②將血袋倒置(底部朝上)離心,離心速度、時間和溫度同正位離心法。③將血袋放在倒置擠壓器上,夾住2號轉移袋通路,並打開1號袋通路,使血袋下部少含白細胞的紅細胞流入1號轉移袋,當白膜層離血袋下口約剩4cm時,適當減慢血流速度,以免形成旋渦而影響白細胞除去效果。④當白膜層離血袋下口只有2cm時,夾住通向1號轉移袋通路,打開2號轉移袋通路,讓白膜流入2號轉移袋。此時可用手指推擠白膜,儘量使更多的白膜擠入2號轉移袋內,直至連接管呈現粉紅色時,夾住通向2號轉移袋的塑料管。⑤從擠壓板上取下血袋,將去除白細胞的紅細胞返回原血袋內。⑥充分混勻後重復步驟②-④,以提高白細胞去除率。⑦將血漿與紅細胞一起正位離心,從血袋分出部分血漿置於紅細胞袋內,配製成70%比容的去白細胞的紅細胞。
2.2 過濾法
使血液通過特製過濾器,利用吸附或阻擋白細胞等原理,將白細胞除去,而製得去白細胞的紅細胞。過濾法簡單、方便,效果又好,它將有效地代替其他方法。
(1)尼龍纖維過濾器:根據尼龍纖維在鈣離子存在下,能選擇性地吸附白細胞這一特性,使血液通過尼龍纖維過濾器,將白細胞吸附,而獲得去白細胞的紅細胞。方法爲:①用肝素抗凝採集全血1個單位,過濾前不要將此血冷卻。②取出事先放入溫箱加溫至37℃的濾器,再用37℃鹽水灌注。③將血袋和濾器連接,於1h內將血液進行過濾,即獲得紅細胞。
(2)棉花纖維過濾器:可用於保存期內任何抗凝血。據文獻報道,接近貯存末期的血液去除白細胞的效果更好。一般過濾後的血液可除去95%以上白細胞,並保留95%以上紅細胞。
(3)微聚物過濾器:全血以5000g離心 7min後,置入4℃±2℃冰箱保存,於輸血前將血液通過1個孔徑爲20-40μm的微聚物過濾器進行過濾。
2.3 沉降法
使用沉降劑,如大分子右旋糖酐(分子量爲15萬~20萬)或羥乙基澱粉 (分子量爲30萬-40萬)或羧甲基澱粉鈉,促使紅細胞快速下沉,而白細胞仍保留在血漿中,分出上層富含白細胞、血小板血漿,下層即爲去白細胞的紅細胞。所得紅細胞可用生理鹽水配製70%比容的紅細胞懸液。本法技術簡單,操作時間短,不需昂貴設備,效果好;缺點是沉降劑分子量大,抗原性強,易引起變態反應。若使用低分子或中分子右旋糖酐或羥乙基澱粉,則沉降效果差。