3 基本信息
ICS 11.020
C 61
中華人民共和國衛生行業標準 WS/T 572—2017《血清中碘的測定 砷鈰催化分光光度法》(Determination ofiodine in serum-As3+-Ce4+catalytic spectrophotometry)由中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會2017年8月16日《關於發佈〈改水降氟效果評價〉等兩項推薦性衛生行業標準的通告》(國衛通〔2017〕13 號)發佈,自2018年2月15日起實施。
4 發佈通知
國衛通〔2017〕13 號
現發佈《改水降氟效果評價》等兩項推薦性衛生行業標準,其編號和名稱如下:
WS/T 90—2017 改水降氟效果評價(代替WS/T 90—1996)
WS/T 572—2017 血清中碘的測定 砷鈰催化分光光度法
上述標準自2018年2月15日起施行,WS/T 90—2016同時廢止。
特此通告。
國家衛生計生委
2017年8月16日
5 前言
本標準按照GB/T 1.1—2009給出的規則起草。
本標準起草單位:中國疾病預防控制中心地方病控制中心、福建省廈門市疾病預防控制中心、山西省地方病防治研究所。
本標準主要起草人:申紅梅、紀曉紅、張亞平、賈清珍、張峯峯、劉麗香、劉穎、黃淑英。
6 標準正文
警告:三氧化二砷試劑是劇毒品!使用者有責任採取適當的安全措施。
6.1 1 範圍
本標準適用於血清中總碘濃度的測定。
6.2 2 原理
採用高氯酸-氯酸鈉溶液消化血清樣品,利用碘對砷鈰氧化還原反應的催化作用:
H3AsO3+2Ce4++H2O→H3AsO4+2Ce3++2H+
反應中黃色的Ce4+被還原成無色的Ce3+,碘含量越高,反應速度越快,所剩餘的Ce4+則越少;控制反應溫度和時間,比色測定體系中剩餘Ce4+的吸光度值,求出碘含量。
6.3 3 儀器
3.1 消化控溫加熱裝置:恆溫消解儀(控溫點精度130℃±2℃,孔間溫差≤1℃)。
3.2 恆溫水浴:控溫精度±0.3℃。
3.3 分光光度計,1cm比色杯。
3.4 玻璃試管:15mm×100mm或15mm×120mm。
3.5 定量移液器:100μL、1000μL、5000μL;
定量玻璃移液管:5mL和10mL。
3.6 秒錶。
3.7 恆溫乾燥箱。
3.8 離心機。
6.4 4 試劑
4.1 本標準所用試劑除另有說明外,均爲分析純試劑,實驗用水應符合GB/T 6682中二級水規格。
4.2 高氯酸(HClO4,70%~72%),優級純。
4.3 氯酸鈉(NaClO3,M=106.4)。
4.4 濃硫酸(H2SO4,ρ20=1.84g/mL),優級純。
4.5 三氧化二砷(As2O3,M=197.8)。
4.6 氯化鈉(NaCl,M=58.4),優級純。
4.7 氫氧化鈉(NaOH,M=40.0)。
4.8 硫酸鈰銨[Ce(NH4)4(SO4)4·2H2O,M=632.6]或四水合硫酸鈰銨[Ce(NH4)4(SO4)4-4H2O,M=668.6]。
4.9 碘酸鉀(KIO3,M=214.0),基準試劑或標準物質。
6.5 5 溶液配製
5.1 氯酸鈉溶液[c(NaClO3) =2.0mol/L]
稱取106.4g氯酸鈉(4.3)溶解於400 mL純水後,再加純水至500mL,置冰箱(4℃)可保存12個月。
取140mL濃硫酸(4.4)緩慢加入到700mL純水中,邊加邊攪拌,冷卻後用純水稀釋至1000 mL。
5.3 亞砷酸溶液[c(H3AsO3)=0.025mol/L]
稱取2.5g三氧化二砷(4.5)、3.0g氫氧化鈉(4.7)置於1L的燒杯中,加純水約30mL攪拌至全部溶解,向燒杯中加純水約500mL,並加入40.0g氯化鈉(4.6),攪拌至完全溶解,再緩慢加入200mL硫酸溶液(5.2),至室溫後用純水定容至1000 mL,儲於棕色瓶,室溫放置可保存6個月。
5.4 硫酸鈰銨溶液[c(Ce4+)=0.025mol/L]
稱取15.8g硫酸鈰銨(4.8)或16.7g四水合硫酸鈰銨[Ce(NH4)4(SO4)4·4H2O]溶於700mL硫酸溶液(5.2),用純水定容至1000 mL,儲於棕色瓶,室溫放置可保存6個月。
5.5 碘標準儲備溶液[ρ(I)=100μg/mL]
準確稱取經105℃~110℃烘乾至恆重的碘酸鉀0.1686g於容量瓶中,加純水溶解,並用純水定容至1000 mL。儲於具塞嚴密的棕色瓶,置冰箱(4℃)可保存6個月。5.6 碘標準中間溶液[ρ(I) =10μg/mL]吸取10.00 mL碘標準儲備溶液(5.5)置於100 mL容量瓶中,用純水定容至刻度。儲於具塞嚴密的棕色瓶,置冰箱(4℃)內可保存1個月。
5.7 碘標準使用系列溶液[ρ(I)=0μg/L~300μg/L]
使用前吸取碘標準中間溶液(5.6)0 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL和3.00mL分別置於100 mL容量瓶中,用純水定容至刻度,此標準系列溶液的碘濃度分別爲0μg/L、50μg/L、100μg/L、150μg/L、200μg/L、250μg/L和300μg/L。
6.6 6 樣品採集和保存
使用一次性真空非抗凝採血管採集不少於2mL血液,室溫靜置0.5h後,於3000r/min離心10min,分離出血清置於具塞聚乙烯塑料管中,嚴密封口以防水分蒸發。在室溫(20℃)下可保存7d,在4℃下可保存1個月,密封後冷凍(-20℃)至少可保存3個月。
6.7 7 分析步驟
7.1 分別取0.10mL碘標準使用系列溶液(5.7)及血清樣(如果血清樣的碘濃度超過標準曲線的碘濃度範圍,則用純水稀釋後取樣)各置於玻璃試管(3.4)中,各管加入0.5mL高氯酸(4.2)、0.6mL氯酸鈉溶液(5.1),混勻後置於130℃的消化控溫加熱裝置中,消化120min,取下冷卻至室溫。可在15℃~30℃之間一個穩定的溫度環境下(室溫或控溫)進行以下7.2~7.4分析步驟,要求溫度波動不超過±0.3℃。
7.2 各管加入3.0mL亞砷酸溶液(5.3),充分混勻後放置15min,使其溫度達到平衡(注意將標準系列管按碘濃度由高至低順序排列)。
7.3 秒錶計時,依順序每管間隔相同的時間(30s或20s)向各管準確加入0.60mL硫酸鈰銨溶液(5.4),立即混勻。
7.4 待第一管(即標準系列中加300μg/L碘濃度管)的吸光度值達到0.10左右時(不同溫度對應的反應時間參考值參見附錄A),依順序每管間隔同樣時間(與7.3間隔時間一致)於400nm波長下,用1cm比色杯,以純水作參比,測定各管的吸光度值。
7.5 標準曲線繪製:以碘濃度爲橫座標,吸光度值對數爲縱座標繪製標準曲線。
6.8 8 結果計算
8.1 迴歸方程法:碘質量濃度c(μg/L)與吸光度值A的對數值成線性關係:見式(1),按式(1)求出標準曲線的迴歸方程,將樣品管的吸光度值代入式(1),求出所測樣品中碘質量濃度,再按式(2)計算血清中碘的質量濃度。
c = a+blgA(或c = a+blnA)……………(1)
式中:
C——碘標準使用系列溶液(或所測樣品)中碘的質量濃度,單位爲微克每升(μg/L);
a——標準曲線迴歸方程的截距;
b——標準曲線迴歸方程的斜率;
8.2 標準曲線法:以碘標準使用系列溶液的碘質量濃度爲橫座標和吸光度值爲對數縱座標,在半對數座標系中繪製標準曲線,以樣品管的吸光度值在標準曲線上查得所測樣品的碘質量濃度,再式(2)計算血清中碘的質量濃度。
ρ(I)=c×K ……(2)
式中:
ρ (I)一—血清中碘(I)的質量濃度,單位爲微克每升(μg/L);
c——由標準曲線查得的或由標準曲線迴歸方程計算得的所測樣品中碘的質量濃度,單位爲微克每升(μg/L);
K——血清樣稀釋倍數。
6.9 9 方法特性
6.9.1 9.2 檢出限和測定範圍
本法檢出限爲6.9μg/L(取血清樣量爲0.10mL),可直接取樣消化測定0μg/L~300μg/L濃度範圍血清碘。
6.9.2 9.3 精密度
在0μg/L~300μg/L碘濃度範圍內,5個實驗室對含碘低、中、高3種濃度的血清樣各做6次重複測定,相對標準偏差爲0.7%~3.8%,平均爲1.7%。
6.9.3 9.4 準確度
在0μg/L~300μg/L碘濃度範圍內,5個實驗室對含碘低、中、高3種濃度的血清樣做加標回收,加入碘標準溶液,使加標回收樣品濃度增加50μg/L~100μg/L,回收率爲90.0%~110.0%,平均爲99.8%。
在本法條件下,溶血和以下物質均不干擾測定:11g/L NaCl,1.5g/L HPO42-,700mg/L KNO3,200mg/L Ca2+,365mg/L Mg2+,2mg/L F-,2mg/L Fe2+,2mg/L Zn2+,2mg/L Cu2+,0.05mg/L Hg2+,2g/L甘氨酸,10g/L葡萄糖,3g/L尿素,30mg/L抗壞血酸,100g/L蛋白。
6.10 10 質量保證和質量控制
10.1 實驗環境、器皿及試劑應避免碘污染,血清樣品在現場採集、運輸和保存過程中應避免與含碘物品接觸。
10.2 樣品消化需使用與恆溫消解儀消化孔孔徑配套的、長度爲100mm或120mm的玻璃試管,以使消化效果一致,保證測定準確度和精密度。
10.4 如果室溫不穩定或室溫較低時,應使用超級恆溫水浴進行7.2~7.4步驟的分析,溫度波動變化不超過±0.3℃。
10.5 標準曲線迴歸方程c=a+blgA或c=a+blnA的相關係數絕對值應≥0.999。