1 概述
丁型肝炎病毒(Hepatitis D Virus,HDV)是一種缺陷性單股負鏈RNA病毒,直徑爲35~37nm,呈球形,其外膜爲HBsAg,核心內含有特異的丁型肝炎病毒抗原(HDAg)和病毒RNA。HDV在成熟過程中,需要藉助於HBsAg作爲外膜蛋白而裝配成完整的病毒顆粒。HDV本身不能感染,只能感染HBsAg陽性者。HDVAg抗原性較強,可刺激機體產生IgM和IgG抗體,這些抗體均爲非中和抗體,對機體無保護作用。
HDV的實驗室檢測可用核酸雜交和PCR方法檢測其RNA,也可用ELISA法和RIA法檢測HDVAg、抗-HDV IgM、抗-HDV總抗體。
3 丁型肝炎抗體的醫學檢查
3.1 檢查名稱
3.2 分類
3.3 丁型肝炎抗體的測定原理
採用雙抗體夾心ELISA法。先用去污劑(Tween 20或NP40)裂解在外面的HBsAg膜,則釋放出的HDVAg與包被在板上的抗-HDV IgG結合,洗滌後加入酶標抗-HDV,顯色爲陽性,無色爲陰性。RIA法原理基本同上述。
3.4 試劑
國內有商品化試劑盒供應,內含HDV包被反應板(條),抗HDV-HRP應用液以及抗HDV陰、陽性對照血清,底物液,終止液等試劑。
3.5 操作方法
按試劑盒使用說明書進行操作。
(1)加樣品:在包被反應板各孔內加入樣品50μl,每次檢驗設陰、陽性對照,37℃保溫1h,洗板3次。
(2)加酶結合物:每孔加入抗HDV-HRP 50μl,37℃保溫1h,洗板5次。
(3)顯色:各孔加入底物液100μl,室溫保溫15min後,各孔加入終止液50μl。
(4)結果判讀:在酶標儀上以試劑空白校零點,測各孔在492nm光密度值,先計算判斷值,然後判斷結果:
3.6 正常值
陰性。
3.7 化驗結果臨牀意義
①高滴度只見於慢性HBsAg攜帶者,HBsAg持續陽性者該滴度保持不變,急性肝炎則較低。
②無症狀慢性HBsAg帶者出現高滴度抗-δ且持續時間較久,則爲慢性肝炎。
③抗原僅存於HBsAg陽性者的肝細胞內,血中測不出,但可測出抗-δ。測定血中的抗-δ可作爲識別δ感染和開展流行病學調查方法之一。
(2)陰性:
②當HBsAg轉陰和GPT正常後數週,抗-δ消失。
3.8 附註
(1)由於丁型肝炎與乙型肝炎感染同時存在,外周血經除污劑處理後,可能HBAg與HBcAg同時存在,因此要注意注意防止HBcAg的干擾,故酶標記物中必須加入非標記的特異性中和HBcAg的單克隆抗體以排除之。