α-羥丁酸脫氫酶

血液生化檢查 化驗及醫學檢查 酶類測定

1 拼音

α-qiǎng dīng suān tuō qīng méi

2 英文參考

α-hydroxybutyrate dehydrogenase

3 概述

α-羥丁酸脫氫酶α-HBDH)與LDH關係十分密切,實際上它是LDH同工酶Ⅰ型,因其對α-酮丁酸親合力高,所以當以α-酮丁酸作爲底物時,所測LDH的活性特稱爲α-羥丁酸脫氫酶活性。α-HBDH測定方法主要有比色法和連續監測法。

4 別名

α-HBDH

5 α-羥丁酸脫氫酶醫學檢查

5.1 檢查名稱

α-羥丁酸脫氫酶

5.2 分類

血液生化檢查 > 酶類測定

5.3 化驗取材

血液

5.4 α-羥丁酸脫氫酶的測定原理

(1)比色法α-HBDH作用於過量的α-酮丁酸生成α-羥丁酸,則剩餘者與2,4-二硝基苯肼形成α-酮丁酸苯腙,在鹼性溶液中呈棕色,其顏色深淺與酶活性成反比。

(2)連續監測法:α-HBDH催化α-酮丁酸還原成α-羥丁酸,同時使NADH氧化成NAD,在340nm監測NADH的氧化速率與該酶活性成正比。

5.5 試劑

(1)比色法

磷酸緩衝液,0.067mol/L,pH 7.4。

A.0.067mol/L Na2HPO4(9.47g/L)。

B.0.067mol/L KH2PO4(9.08g/L)。

取A液80.2ml,加B液19.8ml,4℃保存

②NADH溶液(10mg/ml),臨用前以pH7.4磷酸緩衝液配製。

③0.4g/L 2,4-二硝基苯溶液:稱取2,4-二硝基苯肼400mg,加5mol/L HCl 200ml,待溶解後加蒸餾水至1000ml,4℃冰箱保存數週。

④0.4mol/L NaOH。

⑤0.1mol/L α-酮丁酸貯存液:稱取α-酮丁酸1.02g,加pH7.4磷酸緩衝液約30ml,用飽和NaOH調pH至7.4,再用pH 7.4磷酸緩衝液稀釋至100ml,分裝於試管密塞,冰箱內可保存數月。

⑥1mmol/L α-酮丁酸底物應用液:臨用前將α-酮丁酸貯存液用pH 7.4磷酸緩衝液稀釋100倍。

(2)連續監測法:

①67mmol/L磷酸緩衝液(pH7.2,30℃):9.47g/L Na2HPO4溶液180ml與9.08g/L KH2PO4溶液70ml混合即可。

②71mmol/L α-酮丁酸溶液:稱取22mg α-酮丁酸鈉鹽,溶入25ml磷酸鹽緩衝液中,0~4℃可穩定3個月。

③220μmol/L β-NADH溶液:稱取NADH鈉鹽7.6mg,溶於50ml磷酸鹽緩衝液中,臨用前配製。

5.6 操作方法

(1)比色法:按表1進行操作。

混勻,在10~30min內,以490nm波長,光徑1cm,蒸餾水調零比色,以AU-AC之差值,查標準曲線得酶活力單位。

(2)連續監測法:

①取血清0.05ml,加入NADH溶液2ml,37℃水浴10~15min,使NADH非特異性氧化完成。

②加入預溫至37℃的α-酮丁酸0.1ml充分混合,立即倒入37℃恆溫比色杯內監測。340nm波長,1cm光徑,空氣調零。

③如△A/min>0.08,用磷酸緩衝液稀釋血清5或10倍後重測。

5.7 正常值

(1)比色法:61~155U/L(37℃)。

(2)連續監測法:72~182U/L。

5.8 化驗結果臨牀意義

α-HBDH的活性與LDH的活性變化一致,但更能反映LDH1的活性變化,其特異性比總LDH活性高。與LDH、AST、CK、CK-MB構成心肌酶譜,對診斷心肌梗死更有意義。

(1)心肌梗死α-HBDH活性明顯升高,且維持時間較LDH長,LDH/α-HBDH比值(0.8~1.2)低於正常對照(1.2~1.6)。

(2)鑑別肝病心臟病。肝病心臟病時LDH均可升高,但肝病α-HBDH活性變化不大,LDH/α-HBDH比值可升高至1.6~2.5,而心臟疾病時α-HBDH則明顯升高。

(3)營養不良葉酸維生素B12缺乏時,α-HBDH活性亦可升高。

5.9 附註

(1)比色法

①Rosalki及Wilkinson建立的α-HBDH測定方法是30℃的連續監測法,以國際單位(U/L)計算。上述方法是37℃比色法,爲使各方法間結果有更好的可比性,可轉換成30℃連續監測法的相應單位。37℃轉換成30℃溫度係數爲0.87。

②因紅細胞內該酶活性高,應在2h內及時分離血清標本不能溶血。4℃酶活性穩定不少於7天。

③可用EDTA(1mg/ml)、肝素(0.2mg/ml)抗凝血漿,草酸鹽枸櫞酸鈉氟化物抗凝劑抑制酶活性

(2)連續監測法:

①此法是1980年由英國臨牀化學協會(ACB)推薦,其最適底物濃度爲15mmol/L(25℃),反應混合物的最終濃度:磷酸鹽65.4mmol/L、NADH 0.2mmol/L、α-酮丁酸3.3mmol/L,樣品容積組分比0.023。改爲37℃測定結果與LDH相關性較好。

②α-酮丁酸鈉較穩定,α-酮丁酸長期存放,其縮合物可抑制酶促反應

③國內商品試劑盒的方法,一般是在操作前將α-酮丁酸與NADH溶液混合,置反應溫度條件下數分鐘後,作爲單一試劑取出一定量加入樣品中,延遲時間30s後,監測3min。

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