1 概述
α-羥丁酸脫氫酶（α-HBDH）與LDH關係十分密切，實際上它是LDH同工酶Ⅰ型，因其對α-酮丁酸親合力高，所以當以α-酮丁酸作爲底物時，所測LDH的活性特稱爲α-羥丁酸脫氫酶活性。α-HBDH測定方法主要有比色法和連續監測法。
3 α-羥丁酸脫氫酶的醫學檢查
3.1 檢查名稱
3.2 分類
3.3 化驗取材
3.4 α-羥丁酸脫氫酶的測定原理
（1）比色法：α-HBDH作用於過量的α-酮丁酸生成α-羥丁酸，則剩餘者與2，4-二硝基苯肼形成α-酮丁酸苯腙，在鹼性溶液中呈棕色，其顏色深淺與酶活性成反比。
（2）連續監測法：α-HBDH催化α-酮丁酸還原成α-羥丁酸，同時使NADH氧化成NAD，在340nm監測NADH的氧化速率與該酶活性成正比。
3.5 試劑
（1）比色法：
A.0.067mol/L Na2HPO4（9.47g/L）。
B.0.067mol/L KH2PO4（9.08g/L）。
取A液80.2ml，加B液19.8ml，4℃保存。
②NADH溶液（10mg/ml），臨用前以pH7.4磷酸鹽緩衝液配製。
③0.4g/L 2，4-二硝基苯肼溶液：稱取2，4-二硝基苯肼400mg，加5mol/L HCl 200ml，待溶解後加蒸餾水至1000ml，4℃冰箱保存數週。
④0.4mol/L NaOH。
⑤0.1mol/L α-酮丁酸貯存液：稱取α-酮丁酸1.02g，加pH7.4磷酸鹽緩衝液約30ml，用飽和NaOH調pH至7.4，再用pH 7.4磷酸鹽緩衝液稀釋至100ml，分裝於試管密塞，冰箱內可保存數月。
⑥1mmol/L α-酮丁酸底物應用液：臨用前將α-酮丁酸貯存液用pH 7.4磷酸鹽緩衝液稀釋100倍。
（2）連續監測法：
①67mmol/L磷酸鹽緩衝液（pH7.2，30℃）：9.47g/L Na2HPO4溶液180ml與9.08g/L KH2PO4溶液70ml混合即可。
②71mmol/L α-酮丁酸溶液：稱取22mg α-酮丁酸鈉鹽，溶入25ml磷酸鹽緩衝液中，0～4℃可穩定3個月。
③220μmol/L β-NADH溶液：稱取NADH鈉鹽7.6mg，溶於50ml磷酸鹽緩衝液中，臨用前配製。
3.6 操作方法
（1）比色法：按表1進行操作。
混勻，在10～30min內，以490nm波長，光徑1cm，蒸餾水調零比色，以AU-AC之差值，查標準曲線得酶活力單位。
（2）連續監測法：
①取血清0.05ml，加入NADH溶液2ml，37℃水浴10～15min，使NADH非特異性氧化完成。
②加入預溫至37℃的α-酮丁酸0.1ml充分混合，立即倒入37℃恆溫比色杯內監測。340nm波長，1cm光徑，空氣調零。
③如△A/min＞0.08，用磷酸鹽緩衝液稀釋血清5或10倍後重測。
3.7 正常值
（1）比色法：61～155U/L（37℃）。
（2）連續監測法：72～182U/L。
3.8 化驗結果臨牀意義
α-HBDH的活性與LDH的活性變化一致，但更能反映LDH1的活性變化，其特異性比總LDH活性高。與LDH、AST、CK、CK-MB構成心肌酶譜，對診斷心肌梗死更有意義。
（1）心肌梗死時α-HBDH活性明顯升高，且維持時間較LDH長，LDH/α-HBDH比值（0.8～1.2）低於正常對照（1.2～1.6）。
（2）鑑別肝病和心臟病。肝病和心臟病時LDH均可升高，但肝病時α-HBDH活性變化不大，LDH/α-HBDH比值可升高至1.6～2.5，而心臟疾病時α-HBDH則明顯升高。
（3）營養不良、葉酸和維生素B12缺乏時，α-HBDH活性亦可升高。
3.9 附註
（1）比色法：
①Rosalki及Wilkinson建立的α-HBDH測定方法是30℃的連續監測法，以國際單位（U/L）計算。上述方法是37℃比色法，爲使各方法間結果有更好的可比性，可轉換成30℃連續監測法的相應單位。37℃轉換成30℃溫度係數爲0.87。
②因紅細胞內該酶活性高，應在2h內及時分離血清，標本不能溶血。4℃酶活性穩定不少於7天。
③可用EDTA（1mg/ml）、肝素（0.2mg/ml）抗凝血漿，草酸鹽、枸櫞酸鈉、氟化物抗凝劑可抑制該酶活性。
（2）連續監測法：
①此法是1980年由英國臨牀化學協會（ACB）推薦，其最適底物濃度爲15mmol/L（25℃），反應混合物的最終濃度：磷酸鹽65.4mmol/L、NADH 0.2mmol/L、α-酮丁酸3.3mmol/L，樣品容積組分比0.023。改爲37℃測定結果與LDH相關性較好。
②α-酮丁酸鈉較穩定，α-酮丁酸長期存放，其縮合物可抑制酶促反應。
③國內商品試劑盒的方法，一般是在操作前將α-酮丁酸與NADH溶液混合，置反應溫度條件下數分鐘後，作爲單一試劑取出一定量加入樣品中，延遲時間30s後，監測3min。