細胞毒試驗_註解、細胞毒試驗是什麼、醫療技術名

心氣虛，則脈細；肺氣虛，則皮寒；肝氣虛，則氣少；腎氣虛，則泄利前後；脾氣虛，則飲食不入。

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1 拼音

xì bāo dú shì yàn

2 英文參考

cytotoxicity test

3 註解

4 操作名稱

細胞毒試驗

5 用品及準備

5.1 材料

①50μl加樣器；②250μl加樣器；③微量反應板；④倒置顯微鏡；⑤醫用液體石蠟油；⑥尼龍纖維棉和聚乙稀塑料管(管徑6mm，長160mm)。

5.2 試劑

①抗血清。

②兔補體，無天然細胞毒性，效價合格的混合兔血清。

③5%伊紅-Y溶液。

④12%福馬林（pH7.0~7.4）。

⑤對照組：陽性對照，用兔抗人淋巴細胞血清和抗B 淋巴細胞血清；陰性對照，滅活正常人AB型混合血清。

⑥淋巴細胞分離液（比重1.077±0.02）。

⑦Hanks液（pH6.8~7.4）。

⑧20%小牛血清-RPM1640培養液。

⑨淋巴細胞洗滌液和淋巴細胞保存液。

6 方法及內容

(1)向Terasaki反應板的每孔加10μl液體石蠟油。

(2)每反應板最後兩孔分別加陽性和陰性對照血清，其餘每孔加已知或待檢血清1μl。

(3)每孔加的淋巴細胞懸液或B淋巴細胞懸液1μl，並輕輕搖動，使其與抗血清完全混勻。

(4)室溫(20℃±2℃)培養30min，B細胞置於37℃溫育箱1h。

(5)每孔加兔補體5μl，充分混勻，室溫培養1h，B細胞2h。

(6)每孔加入5％伊紅Y3μl，作用1～3min。

(7)每孔加入12％福馬林8μl，室溫靜置1～2h或4℃冰箱過夜，置顯微鏡下觀察結果。

7 注意事項

對淋巴細胞毒試驗方法有影響的因素很多，所以一般需做多個複本。

(1)淋巴細胞：①純度：沾染的顆粒細胞可吸收抗體，紅細胞及血小板可使計數時間減慢，而引起計數誤差。②濃度：細胞濃度過低，無法計數，其準確性大大下降，細胞濃度大，造成淋巴細胞集聚成團，影響結果。③pH值：中性爲宜，過酸影響細胞致敏，過鹼易造成假陽性。

(2)抗血清：細胞溶解和抗血清效價低也是引起計數誤差的常見原因。

(3)加入補體要充足，以克服抗補體因子。

(4)染料：離心除去沉澱物與雜質。

(5)控制培養溫度與時間。

8 結果判讀

(1)使用倒置相差顯微鏡觀察，計數每孔死細胞百分數。死細胞因透進了伊紅Y染料色暗晦，無折光性，大而無立體感；活細胞有折光性，小而光亮。

(2)結果判讀標準：1＝細胞死亡0～10％；2＝細胞死亡11％～20％；4＝細胞死亡21％～40％；6＝細胞死亡41％～80％；8＝細胞死亡81％～100％。其中，1和2爲陰性反應；4爲可疑或弱陽性反應；6和8爲陽性反應。