3 尿δ-氨基-γ-酮基戊酸的醫學檢查
3.1 檢查名稱
3.2 分類
3.3 化驗取材
3.4 尿δ-氨基-γ-酮基戊酸的測定原理
尿中δ-氨基乙酰丙酸(δ-ALA)與乙酰乙酸乙酯縮合生成吡咯化合物,用乙酸乙酯萃取後,與對-二甲氨基苯甲醛作用,生成紅色化合物,根據顏色深淺比色定量。
3.5 試劑
(1)分光光度計,10mm吸收池。
(2)離心機。
(3)冰乙酸,ρ20=1.05g/ml。
(4)高氯酸,ρ20=1.67g/ml。
(5)無水乙酸鈉。
(7)乙酰乙酸乙酯。
(8)乙酸乙酯。
(9)乙酸鹽緩衝液(pH=4.6):於700ml水中加入57ml冰乙酸,82g無水乙酸鈉,溶解後加水至1000ml。
(10)顯色劑:於30ml冰乙酸中加入1g對-二甲氨基苯甲醛,5ml高氯酸,5ml水,溶解後用冰乙酸稀釋至50ml,混勻,存於冰箱中。
(11)δ-ALA標準溶液:稱取0.01280g δ-ALA·HCl。用水溶解後,移入100ml容量瓶中並稀釋至刻度,此溶液1ml約含0.10mg δ-ALA。再用水稀釋成1ml約含10μg δ-ALA的標準使用溶液。
3.6 操作方法
(1)採樣、運輸和保存:用塑料瓶收集鉛作業工人尿樣50ml,儘快測定比重並帶回實驗室(夏季運輸,最好冷藏),於冰箱(4℃)中可保存2周。
(2)樣品處理:取2支10ml具塞比色管,各加入尿樣1ml、水1ml、緩衝液2ml,混勻。其中一管爲樣品管,加入0.4ml乙酰乙酸乙酯;另一管爲空白管,加入0.4ml緩衝液,充分混勻。
(3)標準曲線的繪製:取6支10ml具塞比色管,分別加入0.00,0.10,0.30,0.50,0.70,1.00mlδ-ALA標準使用液,並加水至2.0ml含(0.0,1.0,3.0,5.0,7.0,10.0μg δ-ALA)。向各管中加入2ml緩衝液,0.4ml乙酰乙酸乙酯,混勻;於沸水浴中加熱12min,取出冷卻至室溫,各加入4ml乙酸乙酯,加塞振搖100次,離心5min,靜置分層;各取2ml乙酸乙酯提取液於另6支10ml具塞比色管中,各加2ml顯色劑,混勻,靜置10min,在554nm處,用10mm吸收池,以零管爲參比測定吸光度。以吸光度值爲縱座標,δ-ALA含量爲橫座標,繪製標準曲線。
(4)樣品測定:將處理後的樣品溶液,按標準曲線繪製操作,測其吸光度。樣品管的吸光度減去尿空白管的吸光度,從標準曲線上查得樣品管中δ-ALA質量。
3.7 正常值
0~45.8μmol/24h(0~6mg/24h)。
3.8 化驗結果臨牀意義
升高:急性鉛中毒。
3.9 附註
(1)醋酸乙酯、乙酰乙酸乙酯以近期產品爲好。如乙酰乙酸乙酯變黃色,即不能使用。顯色劑宜臨用前配製。
(2)尿樣如不能立即測定,應放入冰箱保存。
(3)煮沸時間應從比色管放入水浴後,水重新沸騰,開始計算時間,不得少於12min。