5 方法及內容
5.1 蛋白水解酶法
(包括菠蘿酶、木瓜酶、無花果酶、胰蛋白酶等) 以菠蘿酶介質法爲例：
(1)取菠蘿酶1g，加pH5.5磷酸鹽緩衝液100ml，充分振搖混勻，置37℃水浴箱30min，離心沉澱後取上清液即1％菠蘿酶液。放置4℃冰箱貯存。
(2)待檢者紅細胞及對照紅細胞用生理鹽水洗滌1次(有溶血的紅細胞除外)，配成5％紅細胞懸液。
(3)取小試管15支，分3排，每排試管按C、c、D、E、e順序標記。
(4)每排第1管加抗C血清，第2管加抗c血清，第3管加抗D血清，第4管加抗E血清，第5管加抗e血清各1滴。
(5)第1排各管加待檢者紅細胞懸液各1滴，第2排加陽性對照紅細胞，第3排加陰性對照紅細胞。
(6)每排各管加1％菠蘿酶液1滴。
(7)混勻，置入37℃水浴箱中1h觀察結果，若無凝集，應查找原因。
結果判讀：
(1)傾斜試管肉眼觀察，先看陽性對照管應凝集，陰性對照管不凝集，再看待檢者的試管有凝集者爲陽性，無凝集者爲陰性。如肉眼觀察有疑問者再做鏡檢。
(3)抗RhD陰性者，應作間接抗人球蛋白試驗，以免遺漏Du型。
附註：凡檢查出體內有Rh抗體者，應發給Rh血型卡。需要時，一方面動員捐出血液，另—方面須提高警惕，以免接受不相合的血液而發生意外。
5.2 鹽水介質法
(1)試管法 ①取小試管3支，1支註明抗D，另1支註明陽性對照，最後1支註明陰性對照；②將室溫鹽水反應活性的抗D血清各1滴加入上述試管內；③抗D試管中加入1滴5％待檢者紅細胞(鹽水、血清)懸液，陽性對照及陰性對照試管中分別加入相應的陽性紅細胞及陰性紅細胞懸液1滴；④輕輕混勻，於3000r/min離心15s；⑤取出輕輕擺動觀察有無凝集。
結果判讀：抗D試管中出現凝集，而陰性對照試管不凝集，陽性對照試管凝集，待檢者爲陽性；抗D管和陰性對照管均不凝集，陽性對照試管凝集，待檢者爲陰性。
(2)平板法 ①取潔淨平板1塊，用記號筆劃出反應小格，在左側註明抗D，中間段註明陰性對照，右側註明陽性對照；②將室溫鹽水反應的抗D血清各1滴加入上述小格內；③抗D小格內加入待檢者5％紅細胞懸液1滴，陽性對照小格內加入陽性對照紅細胞懸液1滴，陰性對照小格加入陰性對照紅細胞懸液1滴；④用乾淨玻棒攪拌紅細胞懸液和試劑血清充分混合；⑤連續輕輕傾斜轉動平板，一般在2min內觀察結果，或按試劑介紹規定的時間觀察結果。
結果判讀：同試管法。