2 註解
ABO系HDN是由於母嬰ABO血型不合,母體的IgG抗A或抗B或抗A、B抗體經過胎盤進入胎兒血循環破壞胎兒紅細胞所引起。此病多見於O型母親所生的A型或B型嬰兒,這與O型母親體內本身就含有IgG抗A(B)抗體有關。診斷ABO系HDN最有力證據,是證實患兒紅細胞被來自母親的IgG抗A(B)所致敏。
5 方法及內容
1. 血樣本的預處理
(1) 抽患兒血樣3~5ml,3000r/min離心3min,分離出血清。
(2) 將血塊搗碎成遊離紅細胞後,用生理鹽水洗滌3次,得壓積紅細胞。
(3) 取1滴壓積紅細胞,加19滴生理鹽水配成約5%紅細胞懸液。
4.患兒紅細胞作抗體放散試驗。ABO血型相合,作乙醚放散試驗;ABO血型不合,作加熱放散試驗。
(1) 將患兒紅細胞用生理鹽水洗滌3次後,棄去上清液,得壓積紅細胞。
(3) 置56℃水浴箱加熱放散,振搖7min。
(4) 立即以3000r/min離心5min(離心時爲保持放散時的溫度,應將離心管預先加溫至56℃及管內加入56℃水,並以56℃水作平衡水)。
(5) 取出上清液分成3等份於標有Ac (A細胞)、Bc、Oc的小試管中。
(6) 每小試管中再加入相應的經酶處理的5%紅細胞懸液1滴,置37℃水浴箱溫育15min。
(7) 取出用生理鹽水洗滌3次後,在各管中加入抗人球蛋白血清1滴,以3000r/min離心15s,觀察結果。
注:①間接抗人球蛋白試驗法:甚爲敏感,即使是直接抗人球蛋白試驗陰性的患兒,一旦抗體放散試驗出現陽性結果,即可明確診斷。②Oc“—”尚不能排除放散出ABO血型以外的抗體。
有時在放散試驗的結果觀察中,會遇到一種交叉反應性抗A、B抗體,它針對特異性是A和B抗原所共有的,因而它能凝集A型和B型紅細胞,抗A、B同樣可引起ABO系HDN。
5.遊離抗體試驗 患兒血清中的IgG抗A(B)抗體來自母親,如果患兒血清中發現存在與其紅細胞不配合的IgG抗A(B)或抗A、B抗體時,應將其血清與Ac、Bc、Oc作間接抗人球蛋白試驗加以證實:
(1)取小試管3支,分別標明Ac、Bc、Oc。
(2)在上述各管中,分別加入患兒血清1滴,再加入相應5%紅細胞懸液各1滴。
(3)37℃孵育30min。
(4)取出用生理鹽水洗滌3次後,在各管中加入抗人球蛋白血清1滴。
(5)以3000r/min離心15s,肉眼看結果。
蛋白介質中反應結果
(6)測血清膽紅素、血紅蛋白等,在HDN的膽紅素檢查時,應注意選擇適當的測定方法,採用Lathe—Ruthren改良法,較適合於患兒高膽紅素血癥的檢查。