2 註解
激光共聚焦成像的特性使其不僅能獲得勝過普通顯微鏡的分辨率,同時具有深度識別能力和縱向分辨率,從而可以清晰地觀察較厚的標本,並可以掌握其細節。以一個最小步距0.1um的微動步進馬達控制載物臺升降,使聚焦平面依次位於組織標本的不同層面,可以逐層獲得標本相應的光學橫斷面圖像。這一過程稱爲“光學切片”,這種功能稱爲“顯微CT”。如圖所示,用激光掃描共聚焦顯微鏡對經過熒光染色的神經元從細胞頂部按照Z軸步距,逐層向細胞底部進行斷層掃描,即可獲得該神經元相應的光學橫斷面圖像。圖中可以清楚地發現,在細胞頂部,其胞體面積及突起數量很少,然後依次增加;在細胞中間部位胞體面積和突起數量最多,而後又依次減少;細胞底部胞體面積明顯減少,突起已經基本消失。同時,激光掃描共聚焦顯微鏡還可以利用免疫熒光組織化學以及原位雜交方法的雙重或多重標記同時顯示被檢細胞亞細胞結構和靶分子(蛋白或基因等)與細胞或所在組織的關係。
神經元光學切片圖使用激光掃描共聚焦顯微鏡對經過熒光染色的神經元從細胞的頂部按照Z軸步距,逐層向細胞底部進行斷層掃描,獲得該神經元相應的光學橫斷面圖像