3 概述
以杜鵑花科越橘屬藍莓（Vacciniumcorymbosum L.）果實爲原料，經酶解、水提取、純化、濃縮、乾燥等工藝製成的藍莓花色苷爲新食品原料[1]。可用於乳及乳製品（調製乳和風味發酵乳0.8 g/kg，調製乳粉按照衝調後液體質量折算，乾酪、再製乾酪、乾酪製品、煉乳按照生乳原料倍數折算），飲料類（液體飲料0.8 g/kg，固體飲料按照衝調後液體質量折算），果凍（14 g/kg），可可製品、巧克力和巧克力製品（包括代可可脂巧克力及製品）（14 g/kg），糖果（40 g/kg），冷凍飲品（8g/kg），焙烤食品（4 g/kg），酒類（4 g/kg）[1]。嬰幼兒、孕婦和哺乳期婦女不宜食用，標籤、介紹應當標註不適宜人羣和食用限量[1]。
9 使用範圍和最大使用量
乳及乳製品（調製乳和風味發酵乳0.8 g/kg，調製乳粉按照衝調後液體質量折算，乾酪、再製乾酪、乾酪製品、煉乳按照生乳原料倍數折算），飲料類（液體飲料0.8 g/kg，固體飲料按照衝調後液體質量折算），果凍（14 g/kg），可可製品、巧克力和巧克力製品（包括代可可脂巧克力及製品）（14 g/kg），糖果（40 g/kg），冷凍飲品（8g/kg），焙烤食品（4 g/kg），酒類（4 g/kg）。
10 質量要求
10.1 感官要求
感官要求應符合表 1 的要求。表 1 感官要求
| 項目 | 要求 | 檢驗方法 |
| 色澤 | 深紫色 | 取適量樣品置於潔淨的白色瓷盤中，在自然光線下觀察其色澤和狀態，於透明玻璃燒杯內用水稀釋後，立即嗅其香氣，辨其滋味，靜置 2 min 後，看燒杯底部有無雜質。 |
| 狀態 | 無定形粉末 | |
| 氣味 | 藍莓特有的滋味和氣味 | |
| 雜質 | 無肉眼可見異物 |
10.2 理化指標
理化指標應符合表 2 的規定。
表2 理化指標
| 項目 | 要求 | 檢驗方法 |
| 總花色苷含量（以矢車菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物計），g/100 g | ≥40.0 | 附錄A |
| 總花青素含量（以矢車菊素氯化物計），g/100 g | ≤ 1.0 | 附錄A |
| 水分，g/100 g | ≤ 5.0 | GB 5009.3 |
| 灰分，g/100 g | ≤ 3.0 | GB 5009.4 |
| 粒度（80 目篩通過率），% | ≥ 95 | 《中華人民共和國藥典》四部通則0982“粒度和粒度分佈測定法” |
| 二乙烯苯，μg/kg | ≤ 50.0 | 《中華人民共和國藥典》四部通則0861“殘留溶劑測定法” |
| 鉛（Pb），mg/kg | ≤ 0.1 | GB 5009.12 |
| 總砷（As），mg/kg | ≤ 0.5 | GB 5009.11 |
| 鎘（Cd），mg/kg | ≤ 0.1 | GB 5009.15 |
| 總汞（Hg），mg/kg | ≤ 0.1 | GB 5009.17 |
| 六六六（HCH），mg/kg | ≤ 0.05 | GB 23200.113 |
| 滴滴涕（DDT），mg/kg | ≤ 0.05 | GB 23200.113 |
10.3 微生物限量
表 3 微生物限量
11 附錄 A 總花色苷及總花青素測定方法高效液相色譜法
11.1 A.1 原理
11.2 A.2 儀器
A.2.1 分析天平，感量爲 0.01 mg 和1 mg。
A.2.3 高效液相色譜儀（附紫外檢測器或二極管陣列檢測器）。
A.2.4 有機相 0.45 μm 微孔濾膜。
11.3 A.3 試劑和溶液
除非另有說明，本方法所用試劑均爲分析純，水爲GB/T6682 規定的一級水。試驗中所用溶液在未註明用何種溶劑配製時，均指水溶液。
A.3.1 甲醇，色譜純。
A.3.2 乙腈，色譜純。
A.3.3 無水甲酸，色譜純。
A.3.4 鹽酸。
A.3.5 磷酸。
A.3.6 2%鹽酸-甲醇溶液：準確量取鹽酸20 mL加入800mL甲醇中，再用甲醇定容到 1000 mL，搖勻，即得。
A.3.7 10%磷酸水溶液：準確量取磷酸10 mL，加入80mL水中，再用水稀釋至 100 mL，搖勻，即得。
A.3.8 花色苷標準品：矢車菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物（CAS號：7084-24-4），純度≥96%。
A.3.9 花青素標準品：矢車菊素氯化物（CAS 號：528-58-5），純度≥96%。
A.3.10 花色苷標準儲備液的配製：準確稱取花色苷標準品9.60 mg 於燒杯中，用適量 2%鹽酸-甲醇溶液超聲2 min完全溶解，轉移至 25 mL 容量瓶中，冷卻至室溫，用2%鹽酸-甲醇溶液定容，即得矢車菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物濃度爲400μg/mL 的花色苷標準儲備液（-18℃可保存7 個月）。
A.3.11 花色苷標準使用液的配製：準確移取5.00 mL花色苷標準儲備液至 25 mL 的容量瓶中，用10%磷酸水溶液定容，即得矢車菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物濃度爲80 μg/mL的花色苷標準使用液（-18℃可保存 1 個月）。
A.3.12 花青素標準儲備液的配製：準確稱取花青素標準品9.60mg，置於燒杯中，用適量2%鹽酸-甲醇溶液超聲2min完全溶解，轉移至 25 mL 容量瓶中，冷卻至室溫，用2%鹽酸-甲醇溶液定容，即得矢車菊素氯化物濃度爲400 μg/mL的花青素標準儲備液（-18℃可保存7 個月）。
A.3.13 花青素標準使用液的配製：準確移取1.00 mL花青素標準儲備液至 100 mL 的容量瓶中，用10%磷酸水溶液定容，即得矢車菊素氯化物濃度爲 4 μg/mL 的花青素標準使用液（-18℃可保存 1 個月）。
11.4 A.4 色譜條件
A.4.1 色譜柱：Zorbax Extend-C18柱，250 mm×4.6 mm，5μm，或等效色譜柱。
A.4.2 進樣量：20 µL。
A.4.3 流動相 A：10%甲酸水溶液。A.4.4 流動相 B：甲酸:水:乙腈:甲醇=40:160:90:90。A.4.5 流速：1.0 mL/min。
A.4.6 波長：535 nm。
A.4.7 柱溫：30℃。
11.5 A.5 操作方法
A.5.1 樣品溶液的製備：稱取 0.12500 g 藍莓花色苷待測樣品，置於燒杯中，用適量 2%鹽酸-甲醇溶液超聲2 min 完全溶解，轉移至 25 mL 容量瓶中，再加入2%鹽酸-甲醇溶液10mL，超聲 5 min，冷卻至室溫，用 2%鹽酸-甲醇溶液定容。準確移取上述溶液 5 mL 至 25 mL 的容量瓶中，用10%磷酸水溶液定容，用 0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得樣品溶液。
A.5.2 測定：取花色苷標準使用液、花青素標準使用液、樣品溶液，依次注入高效液相色譜儀進行測定，按外標法計算總花色苷含量和總花青素含量。
11.6 A.6 總花色苷含量的結果計算
樣品中總花色苷的含量按式（1）計算：
式中：
X—樣品中總花色苷含量（以矢車菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物計），單位爲克每百克（g/100 g）；
∑Ai—樣品溶液的液相色譜圖中對應各個花色苷（峯序號爲 1-8、10-15、17）的峯面積之和；
A1—花色苷標準使用液的液相色譜圖中矢車菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物的峯面積；
W1—樣品的質量，單位爲克（g）；
W2—花色苷標準品的質量，單位爲克（g）；計算結果保留小數點後兩位有效數字。
11.7 A.7 總花青素含量的結果計算
式中：
X—樣品中總花青素含量（以矢車菊素氯化物計），單位爲克每百克（g/100 g）；
∑Ai—樣品溶液的液相色譜圖中對應各個花青素（峯序號爲 9、16、18-20）的峯面積之和；
A1—花青素標準使用液的液相色譜圖中矢車菊素氯化物的峯面積；
W1—樣品的質量，單位爲克（g）；
125—樣品總稀釋倍數；
計算結果保留小數點後兩位有效數字。
11.8 A.8 技術參數
當取樣量爲 0.125 g，本方法總花色苷的檢出限爲3g/100g，定量限爲 10 g/100 g；總花青素的檢出限爲0.2 g/100g，定量限爲 0.5 g/100 g。
11.9 A.9 精密度
在重複性條件下獲得的兩次總花色苷含量獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的3%。在重複性條件下獲得的兩次總花青素含量獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的4%。
11.10 附錄
液相色譜圖圖
A.2 液相色譜峯對應組分峯序號
圖 A.2 矢車菊素-3-O-葡萄糖苷氯化物標準參考液相色譜圖圖
A.3 矢車菊素氯化物標準參考液相色譜圖
12 參考資料
- ^ [1] 國家衛生健康委．關於藍莓花色苷等14種“三新食品”的公告（2023年 第3號）[Z]．2023-04-19．