1 概述
戊型肝炎病毒(hepatitis E Virus,HEV)爲經腸道傳播引起戊型肝炎的病原體,呈球形,表面無囊膜,二十面體立體對稱,表面有突起結構,內部核酸爲單股RNA,屬嵌杯狀病毒科的嗜肝RNA病毒屬。HEV有表面抗原HEVAg,可刺激機體產生抗體。
3 抗戊型肝炎病毒抗體的醫學檢查
3.1 檢查名稱
3.2 分類
3.3 化驗取材
3.4 抗戊型肝炎病毒抗體的測定原理
夾心法。包被板上的戊型肝炎抗原(HEVAg)與待測血清中的抗-HEV結合後,再與酶標記抗-人IgG(HRP-抗-人IgG)結合,形成 HEVAg·抗-HEV·HRP-抗-人IgG複合物,經與底物作用後呈現橘黃色反應爲陽性。待測血清中無抗-HEV時則不呈色爲陰性。
3.5 試劑
(1)包被板:用3塊板分別包被HEVAg A、B和陰性對照蛋白。
(2)稀釋液:Tris緩衝液(含熱處理的正常羊血清、牛血清白蛋白和穩定劑)。
(3)酶結合物:HRP-抗-人IgG,用時以稀釋液作1∶1000稀釋。
(4)底物液:1片OPD加入5ml底物緩衝液中溶解混勻。爲無色液體。
(5)洗滌液:0.01mol/L PBST緩衝液(一塊板用300ml)。
(6)終止液:1mol/L H2SO4溶液。
3.6 操作方法
(1)每個待檢血清同時做3塊板。
(2)加樣品。
①3塊板上的每孔加200μl稀釋液。
②各板上的A1B1孔加10μl稀釋液爲空白,C1D1孔加10μl陰性對照血清,E1F1孔加10μl陽性對照血清,G孔以後加10μl待測血清(1∶21)混勻,封板,置37℃溫箱中30min。
(3)洗滌板:用PBST洗滌液洗板6次,拍幹。
(4)加酶結合物:每孔加HRP-抗-人IgG稀釋液100μl,封板,置37℃溫箱中30min。
(5)洗滌板:同3。
(6)加底物顯色:每孔加新鮮配製的底物液100μl,封板,置室溫暗處15min,每孔加終止液50μl。
(7)比色:用酶聯檢測儀波長爲492nm測每孔A值。
3.7 正常值
A值<0.3,陰性。
3.8 化驗結果臨牀意義
戊型肝炎(hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(HEV)引起的病毒性肝炎。抗-HEV是HEV感染人體後產生的特異性抗體,在急性期時增高,恢復期時下降。在急性肝炎患者中的檢出率約爲30%左右(北京地區),與甲型肝炎近似。抗-HEV可做爲HEV感染的早期特異性診斷指標。
3.9 附註
(1)嚴格遵守操作規程。
(2)質量控制空白孔A值<0.2,陰性對照A值>0和<0.2(減去空白),陽性對照A值>0.8(減去空白)。
(4)加樣品和試劑後勿在水浴中保溫。
(5)底物片和底物液勿放在強光下,用非金屬的小鑷子取OPD片。
(6)其它同ELISA法。