抗-HDV-IgM

1 概述

HDV爲缺陷病毒，依賴HBsAg才能複製，表現爲HDV、HBV同時或重疊感染，其傳播途徑主要是生活接觸，也可通過血液製品、輸血、注射等途徑傳播。其實驗室檢查主要是檢測抗原和抗體。

2 別名

抗-HDV-IgM

3 抗丁型肝炎病毒IgM抗體的醫學檢查

3.1 檢查名稱

抗丁型肝炎病毒IgM抗體

3.2 分類

血清學檢查 > 病毒的血清學檢查

3.3 化驗取材

血液

3.4 抗丁型肝炎病毒IgM抗體的測定原理

根據免疫學中抗原，抗體之間的特異性結合的原理，利用抗人免疫球蛋白IgM捕捉待檢血清中的IgM，然後加入丁型肝炎病毒抗原（HDAg）使之與血清中IgM抗HDV抗體結合，然後利用酶標記的抗-HDV IgG，它即具有與HDAg相互反應的免疫學特異性，又具有酶的催化，放大活性。當加入相應底物後，酶使底物氧化（HRP）或水解（AKP）從而使無色底物變爲有色。利用顏色的深淺或A值的高低確定IgM抗HDV抗體的有無和含量的高低。

3.5 試劑

（1）聚苯乙烯塑料板：40孔或96孔板，進口或國產。

（2）可變微量加樣器：20μl，100μ1各1支。

（3）抗人IgM（μ鏈）：鼠抗人IgM單克隆抗體或兔（羊）抗人IgM多克隆抗體。

（4）IgM抗HD陰性，陽性對照血清。

（5）HDAg：大腸桿菌表達的基因工程抗原粗提液。ELISA滴度：1∶640～1∶1280。

（6）HPR-抗HDV IgG：應用改進的過碘酸鈉法標記抗HDV lgG多克隆抗體，使用稀釋度1∶400～1∶4000（於10%小牛血清的PBS液中）。

（7）包被液：0.05mol/L pH9.5～9.6的碳酸鹽緩衝液（Na₂CO₃15.9g，NaHCO₃29.3g加水到1000ML，1∶10稀釋使用）。

（8）洗液：0.01mol/L pH7.2～7.4 PBS T（內含8.5G/LNaCL，0.5‰Tween 20）。

（9）稀釋液：0.01mol/L pH7.2～7.4 PBS。用於稀釋和標記抗體。

（10）底物液：用前新配製。4mg鄰苯二胺（OPD）+10ml基質液（pH5.0磷酸，檸檬酸緩衝液，即Na₂HPO₄18.4g、檸檬酸5.1g溶於1000ml離子水中4℃保存備用）待溶化後加3%H₂O₂50μl混合均勻後立即使用。

（11）終止劑：2mol/L H₂SO₄。

3.6 操作方法

（1）用0.05mol/L pH9.5～9.6的碳酸鹽緩衝液稀釋抗人IgM單克隆抗體，包被聚苯乙烯板，每孔100μl，放4℃過夜。

（2）用PBS T洗3次（中間不停留）拍幹。

（3）每孔分別加入100μl1∶1000稀釋後的待檢血清和陰、陽性對照血清（陰性對照3孔，陽性對照2孔）放37℃1h。

（4）負壓下用PBS T洗板3次（方法同上）抽乾（將血清和廢液抽到消毒瓶內防止污染環境）。

（5）每孔加入50～100μl經適當稀釋後的HDAg（2～4個ELISA單位）放45℃1h。

（6）洗3次後，每孔加入50μlHRP-抗-HDV IgG抗體（於含1%小牛血清的PBS中）放42～45℃1h。

（7）洗3次後，加50μl新鮮配製的底物液，放室溫暗處顯色15～30min，當陽性對照顯黃色後，每孔加入1滴（25μl）2mol/L H₂SO₄終止反應。

3.7 正常值

ELISA法：陰性。

（1）目測法：棕黃色、黃色爲陽性，淺黃色可疑，無色陰性。

（2）比色法：測定波長492nm的光吸收值，並計算其S/N值或閾值（cotoff value）凡檢測樣品的S/N值≥2.1或≥閾值爲陽性，反之爲陰性。

閾值=陰性對照A₄₉₂平均值×2.1

3.8 化驗結果臨牀意義

陽性：丁型肝炎近期感染、感染急性期。

凡IgM抗HDV抗體陽性表示近期或HDV感染急性期，如抗體出現波動是慢性HDV感染的一種表現，如配合抗HBc IgM檢測還能區別是與HBV合作感染還是重疊感染，故具有重要診斷價值。

3.9 附註

HDV本身不能感染，只能感染HBsAg陽性者。HDVAg抗原性較強，可刺激機體產生IgG、IgM抗體，這些抗體均爲非中和抗體，對機體無保護作用。