1 拼音
WS/T 40—1996 niào zhōng 2-liú dài sāi zuò wán -4-suō suān de gāo xiào yè xiàng sè pǔ cè dìng fāng fǎ
2 英文參考
Urine-Determination of 2-thiothiazolidine-4-carboxylic acid-High performance liquid chromatographic method
中華人民共和國衛生行業標準 WS/T 40—1996《尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色譜測定方法》（Urine-Determination of 2-thiothiazolidine-4-carboxylic acid-High performance liquid chromatographic method）由中華人民共和國衛生部於1996年10月14日發佈，自1997年05月01日起實施。
5 3 儀器
3.1 高效液相色譜儀，紫外檢測器。
3.2 電熱恆溫水浴。
3.3 液體快速混勻器。
3.4 微量注射器，20μL。
3.5 移液管，1 mL，5 mL。
3.6 容量瓶，100 mL。
3.7 具塞試管．10 mL。
3.9 尿比重計。
6 4 試劑
本法所用試劑除另有說明外，均爲分析純試劑。
4.1 實驗用水，去離子水經全玻璃蒸餾器重蒸餾後，加蓋保存。
4.2 鹽酸，ρ20=1.19 g/mL。
4.3 冰乙酸，ρ20=1.05 g/mL。
4.5 乙醚，使用新的試劑，否則臨用前須經中性氧化鋁柱除去過氧化物。
4.7 TTCA（2-硫代噻唑烷-4-羧酸）：製備方法見附錄A。
4.8 TTCA標準溶液：準確稱取40.0mg TTCA（4.7），於100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。此溶液1 mL=400μg TTCA。再將其用水稀釋10倍，濃度爲1 mL=40μg TTCA。置4℃冰箱可保存兩週。
4.9 質控樣：用加標的模擬尿、接觸者混合尿或加標的正常人混合尿作質控樣。
8 6 分析步驟
8.1 6.1 儀器操作條件
6.1.1 色譜柱：反相C18鍵合硅膠柱。
6.1.2 流動相：甲醇+水+冰乙酸=14.5+84.5+1； 流速：1.5 mL/min。
6.1.3 紫外檢測波長：273 nm。
8.2 6.2 空白試驗
用正常人混合尿樣按6.3條處理、6.5條測定。
8.3 6.3 樣品處理
取1 mL經離心後的尿樣置於具塞試管中，加入0.1 mL鹽酸溶液（4.6）及5 mL乙醚，於液體快速混勻器上振搖2 min。於3000 r/min離心10 min後，將乙醚溶液全量轉移至另一試管中，置40℃水浴上吹氮至於，加入200μL甲醇溶解殘渣。
8.4 6.4 標準曲線的繪製
取5支具塞試管，按下表配製標準管。
TTCA標準管的配製
管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
TTCA標準溶液（4.8），mL | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
水，mL | 0.4 | 0.3 | 0.2 | 0.1 | 0 |
TTCA含量，μg | 4 | 8 | 12 | 16 | 20 |
取上述標準管中溶液各20μL，進HPLC測定。以TTCA含量（μg）爲橫座標，色譜峯高爲縱座標，繪製標準曲線。
8.5 6.5 樣品測定
取經6.3條處理的樣品液20μL，進HPLC進行測定。同時測定空白樣（6.2）。其色譜圖見下圖。在測定前後及每測定10個樣品後，測定一次質控樣。
TTCA接觸者尿樣色譜圖
9 7 計算
7.1 按式（1）計算尿樣換算成標準比重（1.020）下濃度的校正係數k。
7.2 按式（2）計算尿中TTCA的濃度。
X = 10×c·k ………（2）
式中：
X——尿中TTCA濃度，mg/L；
c——從標準曲線查得的TTCA濃度，μg/20μL。
10 8 說明
8.1 本法檢測限0.8 ng，取尿樣1 mL時，最低檢測濃度爲8 μg/L。線性範圍：0～8 mg/L。精密度：CV=0.52%～3.3%（TTCA含量0～0.8μg．n=12）。準確度：現場樣品加標回收率=78.0%～91.0%（TTCA本底濃度爲1.73～2.84 mg/L，加標濃度爲2～16 mg/L，n=2）。
8.2 對接觸者應取班末尿分析。取樣前工人須脫離工作場所，洗淨手，以防樣品污染。
8.3 影響測定的因素
8.3.1 本法將離心的尿樣經乙醚提取後再次離心，使乙醚層便於分離、轉移，從而保證了分析的準確度。
8.3.2 本法將國外文獻的梯度洗脫條件改爲等度洗脫，在色譜儀只有一個泵的情況下亦可使用，便於在國內推廣。亦可採用兩種流動相切換洗脫（A液：甲醇+冰乙酸+水=0.5+95+4.5；B液：甲醇+冰乙酸+水=95+0.5+4.5），洗脫順序：0～3.5 min，A洗脫：3.5～6.5 min，B洗脫；6.5～10 min，A洗脫。切換洗脫可使尿中雜質較快流出，同時亦適於單泵操作。
8.3.3 色譜柱亦可採用徑向加壓柱Radial-PAK C18，分離效果良好。
8.4 質控樣用加標的模擬尿和加標的正常人混合尿時，可考察測定的準確度及精密度。用接觸者混合尿時則只能考察精密度。但人尿樣品不能久存。模擬尿則只含人尿的大量成分。
11 附錄A TTCA標準品的製備（補充件）
用L-胱氨酸在碳酸鉀存在下與二硫化碳反應24 h。酸化後用稀硝酸和三氯甲烷一丙酮兩次重結晶得純品。
合成方法：碳酸鉀1.12 g（8 m mol）溶解在6 mL水中，加入L-胱氨酸0.96 g（4 m mol）溫熱至全溶。冷卻至室溫後加二硫化碳1.2 mL（16 m mol），室溫（22～25℃），強烈攪拌24 h，用硅膠G薄層控制反應終點，反應完全後用鹽酸酸化至pH=1。反應物以100 mL乙醚分三次提取，合併乙醚提取液以3 mL 10%鹽酸洗滌，分出乙醚層用無水硫酸鎂乾燥。乾燥後的乙醚提取液在40℃左右回收乙醚，真空下蒸乾，得到淡黃色TTCA鬆散的粉末0.74 g粗品。此粗品用6 mL 1+1稀鹽酸加熱溶解，少許活性碳脫色，趁熱過濾，濾液冷卻析出無色針狀結晶0.5 g（熔點180～181℃）。收率76.6%。