1 概述
5'-核苷酸酶(5'-NT)是一種對底物特異性不高的水解酶,可作用於多種核苷酸。此酶廣泛存在於人體組織,如肝、膽、腸、腦、心、胰等。定位於細胞質膜上,在肝內此酶主要存在於膽小管和竇狀隙膜內。5'-NT測定主要是比色法,操作麻煩,難以自動化,但試劑易得,適用於基層單位應用。
3 5'-核苷酸酶的醫學檢查
3.1 檢查名稱
3.2 分類
3.3 5'-核苷酸酶的測定原理
5'-核苷酸酶比色法:5'-NT作用於5'-磷酸腺嘌呤單核苷酸(5'-AMP),生成腺嘌呤核苷和磷酸,利用測無機磷的方法使其顯色,顏色深淺與5'-NT活性呈正相關。
3.4 試劑
(1)0.04mol/L巴比妥緩衝液(pH 7.5):稱取巴比妥鈉8.25g,溶於0.2mol/L HCl 140ml,調pH至7.5(37℃),加蒸餾水稀釋至1000ml。
(2)10mmol/L AMP基質液:精稱5'-AMP 347mg,加0.1mol/L NaOH 18ml,加蒸餾水至100ml,置冰箱保存。
(3)0.1mol/L氯化鎳溶液:稱取氯化鎳(NiCl·6H2O)4.75g,用蒸餾水溶解並稀釋至200ml。
(4)0.02mol/L硫酸錳溶液:稱取MnSO4·H2O 338mg,用蒸餾水溶解並稀釋至100ml。
(5)100g/L三氯醋酸。
(6)2.4mol/L醋酸鹽緩衝液(pH4.0):稱取硫酸銅(CuSO4·5H2O)2.5g,醋酸鈉(CH3COONa·3H2O)46g,加2mol/L醋酸(冰醋酸115ml,以蒸餾水稀釋至1L)至1000ml,用結晶醋酸鈉或冰醋酸調pH至4.0。
(7)50g/L鉬酸銨溶液:稱取5g鉬酸銨[(NH4)6Mo7O24·4H2O]溶於蒸餾水並稀釋至100ml。
(8)還原劑:稱米吐爾(硫酸對甲基氨基酚AR)2g,溶於80ml蒸餾水中,加亞硫酸鈉(Na2SO3·7H2O)10g(或無水亞硫酸鈉5g),加蒸餾水至100ml,過濾後置棕色瓶內冰箱保存,如變爲棕色且有沉澱,則還原性降低,應重配。
(9)磷標準貯存液(6mmol/L):精稱KH2PO40.408g,用蒸餾水溶解並稀釋至500ml,加氯仿數滴防腐。
(10)磷標準應用液(0.06mmol/L):取磷標準貯存液1ml,加100g/L三氯醋酸溶溶液至100ml,4℃冰箱可穩定4周。
3.5 操作方法
按表1操作。
混合後5min,用680nm波長比色,以蒸餾水調零,讀取各管吸光度。
3.6 正常值
2~17U/L。
3.7 化驗結果臨牀意義
5'-NT測定主要用於肝膽系統疾病的診斷和骨骼疾病的鑑別診斷。血清5'-NT活性升高主要見於肝膽系統疾病,如阻塞性黃疸、肝癌、肝炎等,其活性變化與ALP一致。但骨骼系統疾病,如腫瘤轉移、畸形性骨炎、佝僂病、甲狀旁腺功能亢進等,通常ALP活性升高,而5'-NT正常。因此ALP和5'-NT同時測定有助於肝膽和骨骼系統疾病的鑑別診斷。
3.8 附註
(1)用血漿測定可引起混濁,與金屬離子螯合的抗凝劑會干擾鎂的激活作用。
(3)本法酶促反應也可用30min,其計算結果時的係數應改爲20。