3 概述
血清蛋白質是血清固體成分中含量最多的一類物質。血清總蛋白可分爲清蛋白(白蛋白)和球蛋白兩大類。其具有維持血管內正常膠體滲透壓和酸鹼度、運輸多種代謝物、調節被運輸物質的生理作用等多種功能,並與機體免疫功能有密切關係。血清總蛋白水平主要反映肝臟合成功能和腎臟病變造成蛋白質丟失的情況。總蛋白檢查可間接瞭解機體的營養狀況,協助診斷某些疾病。總蛋白檢查抽取靜脈血,用雙縮脲法測定。
4 血清總蛋白的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 血清總蛋白的測定原理
凡分子中含有兩個氨基甲酰基(-CONH2)的化合物都能與鹼性銅溶液作用,形成紫色復合物,這種反應稱雙縮脲反應。蛋白質分子中有許多肽鍵(-CONH-)都能起此反應,而且各種血漿蛋白顯色程度基本相同,因此,在嚴格控制條件下,雙縮脲反應可作爲血漿蛋白總量測定的理想方法,從測定的吸光度值計算出蛋白含量。吸光度的大小與試劑的成分、pH、反應溫度有關。
4.5 試劑
(1)6mol/L氫氧化鈉:溶解240g優質純氫氧化鈉於新鮮製備的蒸餾水或剛煮沸冷卻的去離子水中,稀釋至1L,置聚乙烯瓶內蓋緊保存。
(2)雙縮脲試劑:稱取未風化沒有丟失結晶水的硫酸銅(CuSO4·5H2O)3g,溶於500ml新鮮製備的蒸餾水或剛煮沸冷卻的去離子水中,加酒石酸鉀鈉9g,碘化鉀5g,待完全溶解後,加入6mol/L氫氧化鈉100ml,並用蒸餾水稀釋至1L。置聚乙烯瓶內蓋緊保存。
(3)雙縮脲空白試劑:溶解酒石酸鉀鈉9g,碘化鉀5g,於新鮮製備的蒸餾水中。加6mol/L氫氧化鈉100ml,再加蒸餾水稀釋至1L。
(4)蛋白標準液:收集混合血清,用覬氏定氮法測定蛋白含量,亦可用定值參考血清或白蛋白標準血清。
4.6 操作方法
操作方法見表1。
混勻,置25℃30min(或37℃10min),用波長540nm。以空白管調零,讀取各管的吸光度。
高脂血症、高膽紅素血癥及溶血標本,應作“標本空白管”;即取血清0.1ml加雙縮脲空白試劑5ml,以測定管吸光度減去標本空白管吸光度爲測定管的標準吸光度。
4.7 正常值
60~80g/L。
4.8 化驗結果臨牀意義
(1)血清總蛋白濃度增高:
①血清中水分減少,而使總蛋白濃度相對增高。凡體內水分排出大於水分的攝入時,均可引起血漿濃縮,尤其是急性失水時(如嘔吐、腹瀉、高熱等)變化更爲顯著,血清總蛋白濃度有時可達100~150g/L。休克時,由於毛細血管通透性的變化,血漿也可發生濃縮。慢性腎上腺皮質功能減退病人,由於鈉的丟失而致繼發性水分丟失,血漿也可出現濃縮現象。
②血清蛋白合成增加,大多數發生在多發性骨髓瘤患者,此時主要是球蛋白增加,其量可超過50g/L,總蛋白可超過100g/L。
(2)血清總蛋白濃度降低:
①合成障礙,主要爲肝功能障礙。肝臟是合成蛋白質的唯一場所,肝功能嚴重損害時,蛋白質的合成減少,以白蛋白的下降最爲顯著。
②蛋白質丟失,如嚴重灼傷時,大量血漿滲出;大出血時,大量血液的丟失;腎病綜合徵時,尿液中長期丟失蛋白質;潰瘍性結腸炎可從糞便中長期丟失一定量的蛋白質,這些均可使血清總蛋白濃度降低。
4.9 附註
(1)血清蛋白質的含量一般用g/L表示,因爲各種蛋白質的分子量不同,不能用mol/L表示。
(2)酚酞、溴磺肽鈉在鹼性溶液中呈色,影響雙縮脲測定的結果,右旋糖酐可使測定管混濁亦影響結果,理論上這些干擾均可用相應的標本空白管來消除,但如標本空白管吸光度太高,可影響結果的準確度。
(3)含脂類極多的血清,呈色後混濁不清,可用乙醚3ml抽提後再進行比色。