1 拼音
G B Z / T 3 3 0 — 2 0 2 4 niào zhōng 1 , 2 - shuāng qiǎng jī - 4 - ( N - yǐ xiān bàn guāng ān suān ) - dīng wán cè dìng biāo zhǔn yè xiāng sè pǔ - chuàn lián zhì pǔ fǎ
2 英文參考
Determination standard of 1,2-dihydroxy-4-(N-acetylcysteine)-butaneinurine—Liquid chromatography-tandem mass spectrometry
3 基本信息
ICS 13.100
CCS C 52
中華人民共和國國家職業衛生標準GBZ/T330—2024《尿中1,2-雙羥基-4-(N-乙酰半胱氨酸)-丁烷測定標準 液相色譜-串聯質譜法》（Determination standard of 1,2-dihydroxy-4-(N-acetylcysteine)-butaneinurine—Liquid chromatography-tandem mass spectrometry）由國家衛生健康委於2024年03月11日《關於發佈《職業性中毒性肝病診斷標準》等8項國家職業衛生標準的通告》（國衛通〔2024〕2號）發佈，自2024年09月01日起實施。本標準爲推薦性標準。
4 發佈通知
關於發佈《職業性中毒性肝病診斷標準》等8項國家職業衛生標準的通告
國衛通〔2024〕2號
現發佈《職業性中毒性肝病診斷標準》等8項國家職業衛生標準，編號和名稱如下：
一、強制性國家職業衛生標準
GBZ 59—2024 職業性中毒性肝病診斷標準（代替GBZ 59—2010）
GBZ 76—2024 職業性急性化學物中毒性神經系統疾病診斷標準（代替GBZ 76—2002）
GBZ 82—2024 職業性滑囊炎診斷標準（代替GBZ 82—2002）
GBZ 185—2024 職業性三氯乙烯藥疹樣皮炎診斷標準（代替GBZ 185—2006）
GBZ 237—2024 職業性刺激性化學物質所致慢性阻塞性肺疾病診斷標準（代替GBZ/T 237—2011）
二、推薦性國家職業衛生標準
GBZ/T 300.165—2024 工作場所空氣有毒物質測定標準第165部分：乙草胺
GBZ/T 329—2024 職業性慢性化學物中毒診斷標準總則
GBZ/T 330—2024 尿中1，2-雙羥基-4-（N-乙酰半胱氨酸）-丁烷測定標準液相色譜-串聯質譜法
上述強制性標準自2025年3月1日起施行，GBZ 59—2010、GBZ 76—2002、GBZ 82—2002、GBZ 185—2006、GBZ/T 237—2011同時廢止。
上述推薦性標準自2024年9月1日起施行。特此通告。
國家衛生健康委
2024年3月11日
5 前言
本標準爲推薦性標準。
本標準由國家衛生健康標準委員會職業健康標準專業委員會負責技術審查和技術諮詢，由中國疾病預防控制中心負責協調性和格式審查，由國家衛生健康委職業健康司負責業務管理、法規司負責統籌管理。
本標準起草單位：山東省職業衛生與職業病防治研究院、山東省疾病預防控制中心、山東省產品質量檢驗研究院、泰安市疾病預防控制中心、江蘇省疾病預防控制中心、復旦大學。
本標準主要起草人：趙敬、程學美、邵華、宋利羣、周莉莉、劉冰、張天亮、朱寶立、夏昭林。
6 標準正文
尿中 1,2-雙羥基-4-(N-乙酰半胱氨酸)-丁烷測定標準
液相色譜-串聯質譜法
6.1 1 範圍
本標準規定了測定尿中1,3-丁二烯代謝產物1,2-雙羥基-4-（N-乙酰半胱氨酸）-丁烷（DHBMA）的液相色譜-串聯質譜法。
本標準適用於職業接觸1,3-丁二烯人員尿中1,2-雙羥基-4-（N-乙酰半胱氨酸）-丁烷（DHBMA）濃度的測定。
6.2 2 規範性引用文件
下列文件中的內容通過文中的規範性引用而構成本標準必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用於本標準；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用於本標準。
WS/T 97 尿中肌酐分光光度測定方法
WS/T 98 尿中肌酐的反相高效液相色譜測定方法
6.3 3 術語和定義
GBZ/T 295界定的術語和定義適用於本標準。
6.4 4 原理
尿樣經乙酸銨溶液稀釋，微孔濾膜過濾後用液相色譜-串聯質譜儀檢測，以保留時間和特徵離子丰度比值進行定性，同位素內標校準曲線法定量。
6.5 5 儀器
5.1 漩渦震盪器。
5.2 微孔濾膜：0.45 µm，水相。
5.4 離心管：2 mL。
5.5 液相色譜-串聯三重四級杆質譜儀（LC-MS/MS）。
儀器操作參考條件：
a) 色譜條件：
——色譜柱：四乙氧基硅氧烷鍵合的硅膠顆粒，T3 1.8 µm，規格：2.1 mm×150 mm；
——柱溫：40 ℃；
——進樣量：5 µL；
——流動相：15 mmol/L乙酸銨(pH：6.8)：乙腈；
——梯度洗脫條件見表1。
表 1 梯度洗脫條件
b) 質譜條件：
——離子源溫度（TEM）：650 ℃；電噴霧離子電壓（IS）：-4000 V；碰撞氣（CAD）：7psi；氣簾氣（CUR）：45 psi；霧化氣（GS1）：55 psi；輔助氣（GS2）：65 psi；
6.6 6 試劑
6.1 實驗用水：去離子水。
6.2 甲醇：色譜純。
6.3 異丙醇：色譜純。
6.4 乙酸銨：色譜純。
6.5 乙腈：色譜純。
6.7 DHBMA-D7，標準物質或標準品（純度≥95%）。
6.8 乙酸銨溶液（15 mmol/L）：精確稱取 2.31 g 乙酸銨，置於燒杯中，加入少量去離子水，超聲10min後，用去離子水溶解並定容至 2 L，該溶液 pH 約爲 6.8。
6.9 標準貯備液：精確稱取適量 DHBMA，用去離子水溶解並定容，配製成濃度爲1000.0 mg/L的標準貯備溶液，此溶液在 4 ℃條件下可穩定保存 3 個月。
6.10 標準應用溶液：用去離子水將 DHBMA 標準貯備溶液稀釋成濃度分別爲10.0 mg/L、1.0mg/L、100.0 μg/L 的標準應用溶液。
6.11 內標貯備溶液：精確稱取適量 DHBMA-D7，用去離子水溶解並定容，配製成濃度爲1000.0mg/L的內標貯備溶液。
6.12 內標應用溶液：用去離子水將內標貯備溶液稀釋，配製成濃度爲 600.0 μg/L 的DHBMA-D7內標應用溶液。
6.7 7 樣品採集、運輸和保存
7.1 樣品的採集：按 GBZ/T 295 要求採集班末尿液樣品 50 mL，置於 2 支具塞聚乙烯塑料瓶，嚴密封口。
7.2 樣品空白的採集：在樣品採集過程中，用 50 mL 去離子水代替尿樣，加入尿樣容器，與樣品同時運輸和儲存，作爲樣品空白。
7.3 樣品應置 4 ℃條件下密封避光保存和運輸，樣品在 4 ℃條件下可穩定保存14 d。
6.8 8 分析步驟
8.1 肌酐測定：取出 1 支尿液樣品，按 WS/T 97 或 WS/T 98 測定尿中肌酐濃度。
8.2 樣品處理：尿樣置於室溫平衡經振盪混勻後，取 100 µL 尿樣置於 2 mL 離心管內，加入50µL內標應用溶液，再加入 850 µL 乙酸銨溶液，渦旋混勻，經微孔濾膜過濾後，待測。
8.3 內標標準系列溶液的配製與測定：用乙酸銨溶液將標準應用溶液採用逐級稀釋方法配成濃度爲0.0 μg/L～1000.0 μg/L 的 DHBMA 標準系列溶液，並分別加入 50 µL 內標應用溶液。參照儀器操作條件，測定內標標準系列溶液。以測得的 DHBMA 信號值與相應的內標物 DHBMA-D7 的信號值的比值爲縱座標，以 DHBMA 的濃度爲橫座標，計算線性迴歸方程。
——定性測定：按照液相色譜-串聯質譜條件測定樣品溶液和標準溶液，樣品中待分析物色譜峯的保留時間與相應標準色譜峯的保留時間相比較，相對誤差應在±5 %之內。如果檢測樣品的待分析物色譜峯保留時間與標準品一致，並且在扣除背景後的質譜圖中，待分析物的定性離子和定量離子均出現，且所選的離子相對丰度比與質量濃度相當的標準工作溶液相比，其允許偏差不超過表 3 規定的範圍，則可判定樣品中存在待分析物；
——定量測定：用測定標準系列溶液的操作條件檢測樣品和樣品空白溶液，同位素內標校準曲線法進行定量。
8.5 質量控制：樣品溶液中待分析物的響應值均應在儀器測定的線性範圍內。用接觸者混合尿或加標的正常人混合尿作質控樣。根據測定儀器的穩定性，在測定前後以及每測定10 個～30 個樣品測定一次質控樣和樣品空白。
6.9 9 計算
按式（1）計算尿中 DHBMA 的濃度按式（1）計算： Cr
式中：
ρ1——尿中DHBMA的濃度，單位爲毫克每克肌酐（mg/g Cr）；
K ——尿樣稀釋倍數；
ρ0——測得的待測物濃度，單位爲微克每升（μg/L）；
Cr——尿肌酐濃度，單位爲克每升（g/L）。
6.10 10 說明
10.1 本方法檢出限爲 3.02 µg/L，方法定量下限爲 10.07 µg/L，測定範圍爲3.02 μg/L～1000.0μg/L，批內精密度爲 1.1 %～4.7 %，批間精密度爲 2.0 %～5.5 %，加標回收率爲90 %～105 %。在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的相對偏差應≤10 %。
10.2 本方法可同時測定尿中1,3-丁二烯另外一種巰基尿酸代謝產物 1-(N-乙酰半胱氨酸)-2-羥基-3-丁烯（MHBMA）。
10.3 尿樣 DHBMA 的 LC-MS-MS MRM 見圖 1，總離子流圖見圖 2。
圖 1 DHBMA的LC-MS/MS MRM圖
