5 丁型肝炎抗原的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 化驗取材
5.4 丁型肝炎抗原的測定原理
丁型肝炎病毒抗原外被乙型肝炎表明抗原(HBsAg)包裹,當用除污劑(Tween20或NP40)裂解後才被釋放出來,利用抗原抗體特異性結合的免疫學原理,應用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法進行檢測。
5.5 試劑
(2)HRP-抗HDV抗體。
(3)具有中和活性的抗HBc單克隆抗體ELISA滴度1∶10萬,用於稀釋HRP-抗HD。
(4)10%Tween 20。
(5)其它器材和溶液均同上。
5.6 操作方法
(1)取包被液稀釋抗-HDV IgG包被聚苯乙烯板,每孔100μl放37℃1h,4℃過夜。
(2)洗3次後,每孔分別加入待檢血清和陰、陽性對照血清50μl(陰性對照血清孔,陽性對照血清2孔)和10%Tween20 50μl,充分混合均勻後放室溫過夜,使之裂解丁肝病毒表麪包裹的HBsAg釋放丁肝抗原。
(3)洗3次後,每孔加入50μl HRP-抗HDV抗體(稀釋液中除含10%小牛血清外還含有10個ELISA單位的抗HBc單克隆抗體),放45℃1h(或37℃2h)。
(4)洗3次後,每孔加50μl新鮮配製的底物液,放室溫暗處顯色15~30min後每孔加25μl 2mol/L H2SO4終止反應。
5.7 正常值
(1)目測法:棕色或黃色爲HDAg陽性,無色爲陰性。
(2)比色法:應用酶標儀測定波長492nm的光吸收值(A),根據樣品的A值和陰性對照A平均值計算S/N值或閾值,凡樣品S/N值≥2.1或大於閥值爲陽性,反之爲陰性。
閾值=陰性對照A492平均值×2.1。
5.8 化驗結果臨牀意義
丁型肝炎病毒抗原,存在受感染的肝組織細胞內,外周血的完整病毒內,患者外周血中HDAG陽性表明體內有丁肝病毒複製,血中有丁型肝炎病毒。
5.9 附註
(1)由於丁型肝炎與乙型肝炎感染同時存在,外周血經除污劑處理後,可能HBAg與HBcAg同時存在,因此要注意注意防止HBcAg的干擾,故酶標記物中必須加入非標記的特異性中和HBcAg的單克隆抗體以排除之。