3 概述
皮質醇(cortisol)由腎上腺皮質束狀帶所分泌,在血液中以結合態和遊離態兩種形式存在。遊離狀態的皮質醇僅佔10%左右,具有生物活性,並可從腎臟濾過;結合態者主要與糖皮質類固醇結合蛋白(CBG)相結合,少量與白蛋白結合,無生物活性,不被肝細胞破壞,也不能從腎小球濾過。皮質醇的分泌主要受垂體分泌的促腎上腺皮質激素的調節,其分泌有明顯的晝夜節律,上午8時左右分泌達高峯,以後逐漸下降,午夜零點最低。皮質醇對機體的物質代謝、免疫功能和多種器官的生理功能具有十分重要的作用。
5 血漿皮質醇的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 取材
5.4 血漿皮質醇的測定原理
血漿中的皮質醇95%以上是與血漿中的蛋白質(CBG)相結合的形式存在。採用加熱變性或有機溶劑提取將結合型轉變爲遊離型。以皮質醇-3-組胺製備125I標記物。樣品中的皮質醇和125I標記物共同競爭性的與限量抗體結合。根據競爭抑制基本原理,從標準曲線直接查得血漿中皮質醇濃度。
5.5 試劑
(1)0.1mol/L pH7.4磷酸鹽緩衝液:每1000ml中加明膠1g,NaN30.5g。放4℃保存。
(2)抗血清:以皮質醇-3-BSA爲免疫原,注射新西藍兔獲得抗血清,經鑑定滴度達1∶40000,與其它甾體類激素交叉反應<10%。按可供測100管的量分裝,冷凍乾燥。4℃保存。臨用前緩衝液11ml溶解。
(3)皮質醇-3-125I組胺:取皮質醇-3-組胺5μg/瓶,用常規氯胺T氧化法標記125I。硅膠G薄板層析分離。經鑑定免疫活性,按可供測100管分裝,冷凍乾燥,4℃保存。臨用前加11ml緩衝液溶解。
(4)標準皮質醇貯存液:取經層析純化的皮質醇1mg,加無水乙醇100ml。放-20℃可長期保存。
(5)標準液:取去激素正常人血清,每L中加25,50,100,500,1000,2000μg皮質醇。分裝每瓶0.5ml,冷凍乾燥,4℃保存。臨用前加0.5ml蒸餾水溶解。
(6)分離劑:取100目活性炭1.2g,BSA 0.2g加緩衝液100ml,磁力攪拌20min,4℃保存。
5.6 操作方法
(1)加熱變性法:
①取血漿或標準0.1ml至玻璃管中,加生理鹽水0.9ml,混合,放沸水浴中5min。即刻取出冷卻。
②取10mm×75mm塑料管,按表1加入樣品和試劑。
③加入分離劑後放4℃ 20min,離心(3500r/min 4℃)15min。將上清傾出至計數管中,測放射性,以標準曲線直接得樣品值。
(2)乙醇提取法:
①取血漿或標準血清0.1ml加至提取管中,加入60%乙醇0.9ml,置液體快速混勻器1min。離心10min。將上清移至另一管中,即爲樣品提取液。
②取10mm×75mm塑料管,按和變性提取法見表1相同程序加入樣品和試劑。並按相同方法分離B、F,繪製標準曲線和直接得出樣品中的皮質醇濃度。
①收集24h尿液,預先向容器內加麝香草酚約0.2g作防腐劑。將尿液加蒸餾水至總量2000ml。混勻,留取10ml置4℃冰箱保存。
②取尿液1ml至提取管中,加10ml二氯甲烷在振盪器上振搖5min。吸出水相,用0.1mol/LNaOH 2ml洗滌1次,蒸餾水2ml洗兩次。吸去水相,放-20℃ 30min。吸出二氯甲烷液5.0ml,氮氣吹乾。殘渣溶於1ml含有5%乙醇的緩衝液溶解。
③取皮質醇標準貯存液(10μg/ml),用含5%乙醇的緩衝液稀釋至2.5,10,50,200,800μl/L。
④取10mm×75mm塑料管,按表2加入樣品和試劑。
⑥以B/B0%對標準管濃度繪製標準曲線,從標準曲線查得樣品值乘4即得尿中遊離皮質醇μg/L。
5.7 正常值
血漿:上午8~9時(442±276)nmol/L,下午3~4時(221±166)nmol/L。
5.8 化驗結果臨牀意義
(1)腎上腺皮質因增生、腺瘤、癌變等所致的皮質醇增多增多症患者,其血漿、24小時尿以及唾液中皮質醇含量均明顯增高,晝夜節律消失。垂體ACTH癌和異位ACTH綜合徵患者由於ACTH分泌增多,可致血漿皮質皮質皮質醇相應升高。各種原因所致的高糖皮質類固醇激素結合蛋白(CBG)血癥血皮質醇水平明顯增高。皮質醇在肥胖症以及心肌梗死、腦血管意外、休克等危重疾病亦可升高。
(2)皮質醇濃度下降的疾病有:原發性或繼發性腎上腺皮質功能減退症、家族性糖皮質類固醇結合蛋白(CBG)缺陷症、Graves病、低蛋白血症、嚴重肝病或腎臟疾病等。長期應用糖皮質激素、鎮靜藥、中樞性降壓藥等藥物也可使皮質醇水平下降。
5.9 附註
因血液中皮質醇生理波動較大,早晨最高,以後逐漸降低,入睡後降至最低水平。臨牀上一般於早晨8時左右採血標本送檢。