傷寒、副傷寒甲二聯菌苗

1 拼音

shāng hán 、fù shāng hán jiǎ èr lián jūn miáo

2 註解

3 傷寒、副傷寒甲二聯菌苗製造及檢定規程

^[1]本品系用傷寒、副傷寒甲菌培育後取菌苔製成懸液，加甲醛殺菌，以磷酸鹽緩衝生理鹽水稀釋成每ml含傷寒1.5億菌，副傷寒甲1.5億菌製成。用於預防傷寒、副傷寒甲。

3.1 菌種

1.1　菌種來源

製造傷寒、副傷寒甲二聯菌苗用的菌種及檢定菌種用的診斷血清，應由中國藥品生物製品檢定所分發或經同意。

1.2菌種檢定

檢定菌種可用pH7.2～7.4的肉湯瓊脂、馬丁瓊脂或其他適宜的培養基。

1.2.1培養特性

製造菌苗的菌株應具有的典型的形態、培養和生化特性。

1.2.2血清凝集試驗

用37℃培養18～20小時的培養物以磷酸鹽緩衝生理鹽水稀釋成含菌6億/ml，與相應的傷寒、副傷寒甲菌診斷血清作定量凝集試驗，搖勻後37℃過夜，以肉眼見到凝集（+）之血清最高稀釋度爲凝集反應之效價。凝集價不應低於血清原效價之半。並用傷寒Vi及O血清做凝集試驗，應與Vi血清有凝集，與O血清不凝集，或僅有較低凝集。

1.2.3毒力試驗

用37℃培育12～16小時的瓊脂培養物以生理鹽水稀釋，傷寒稀釋成6億/ml、3億/ml、1.5億/ml及0.75億/ml，副傷寒甲稀釋成15億/ml、7.5億/ml及3.75億/ml等濃度的菌液（根據菌種毒力情況可作更改也可增加稀釋度）。

第一稀釋度菌懸液腹腔注射體重14～16g小白鼠至少5只，每隻0.5ml，觀察3天，使小白鼠於感染後3天內全部死亡的最小劑量爲1個致死量（LD），傷寒菌種1LD應不超過1.5億菌，副傷寒甲菌種不超過7.5億菌。

1.2.4毒性試驗

用37℃培育18～20小時瓊脂培養物混懸於磷酸鹽緩衝生理鹽水內，56℃加溫1小時（或其他方法殺菌），不加防腐劑。殺菌試驗合格後稀釋成每ml含菌60、30及15億共3個濃度，每一濃度的菌懸液以0.5ml腹腔注射體重15～18g小白鼠5只，觀察3天，注射7.5億菌之小白鼠應全部生存，注射15億菌的5只小白鼠可有3只死亡。

1.2.5免疫力試驗

按《傷寒、副傷寒甲、乙三聯菌苗製造及檢定規程》1.2.5項進行。

1.2.6抗原性試驗

選體重2kg左右之健康家兔至少3只，用免疫力試驗所用之菌液靜脈注射3次，每次0.5ml，第1次注射7億菌，第2次14億菌，第3次21億菌，每次間隔7天。末次注射後10～14天採血做定量凝集試驗測定效價。傷寒菌免疫的血清對免疫菌效價應不低於1∶12800，副傷寒甲效價不低於1∶6400，2/3家兔血清之凝集價達上述要求即爲合格。

1.3菌種保存

菌種應凍幹保存，凍幹菌種保存於2～8℃。

菌種凍幹後應抽取樣品按1.2.2項進行檢查，合格後可使用3年。以後每次生產前必須檢查全部特性一次，合格者可繼續使用2年。

3.2 菌苗製造

製造傷寒、副傷寒甲二聯菌苗所用的每一菌種選用2個菌株。

2.1菌種

凍幹菌種啓開後檢查菌形、純度及進行玻片凝集試驗（傷寒菌加用Vi血清），合格後即可使用。每啓開1支凍幹菌種用於生產不超過6代。

2.2製造用培養基

用pH7.2～7.4的馬丁瓊脂或其他適宜的培養基。

2.3原液製造

2.3.1接種

採用塗種，接種後置37℃培育18～24小時。

2.3.2採集

採集前應逐瓶檢查，有雜菌者廢棄。刮取菌苔混懸於磷酸鹽緩衝生理鹽水中。

2.3.3純菌試驗

原液採集後應逐瓶取樣接種瓊脂斜面1管，於37℃培育2天，24～26℃1天，有雜菌生長應廢棄。

2.3.4殺菌

原液用甲醛溶液殺菌，各種原液加入甲醛溶液濃度如下：

傷寒菌原液不超過1.1%±0.1%（ml　/ml）。

副傷寒甲菌原液不超過1.4%±0.1%(ml　/ml)。

加殺菌劑後的原液應放在37℃，不得超過7天，以後保存於2～8℃。

2.3.5無菌試驗

純菌試驗合格的原液，應取樣接種不含瓊脂的硫乙醇酸鹽培養基及普通瓊脂斜面各1管，放37℃培育5天，有本菌生長，可加倍量複試一次；有雜菌生長應廢棄。

2.3.6原液合併

無菌試驗合格之原液，安不同菌株或不同製造日期分別過濾合併，合併後應加不超過0.5%(g/ml)的苯酚或其他適宜之防腐劑，保存於2～8℃。

2.4原液檢定

2.4.1鏡檢

菌形應正常，無雜菌。

2.4.2凝集試驗

原液與相應血清進行凝集試驗，其凝集效價不應低於血清原效價之半。

2.4.3無菌試驗

按《生物製品無菌試驗規程》進行。

2.4.4濃度測定

應按中國細菌濁度標準與質量檢定部門會同測定濃度。

2.4.5免疫力試驗

原液於無菌試驗合格後與質量檢定部門會同進行。抽驗批數應不少於生產批數的1/5。方法同1.2.5項，唯所用小白鼠每組至少15只。對傷寒或副傷寒甲毒菌之攻擊，均應保護60%小白鼠活存爲合格。

2.5原液保存

原液應保存於2～8℃。原液自採集之日起至用於菌苗稀釋時不得少於4個月，保存效期自採集之日起爲2年半。

2.6菌苗稀釋

2.6.1原液配合

稀釋前應先將不同菌種所制之原液按比例配合。每一種菌所加的菌數與應加菌數在總菌數不變的原則下，允許兩種菌之間在20%的範圍內互有增減；同一種菌不同菌株之原液按等量混合，但每個菌株所加的菌數與應加菌數在總菌數不變的原則下，允許兩個菌株之間在40%範圍內互有增減。

2.6.2菌苗稀釋

稀釋菌苗用含0.25%～0.5%（g　/ml）苯酚或其他適宜的防腐劑之磷酸鹽緩衝生理鹽水。

2.6.3菌苗濃度

菌苗每ml含傷寒菌1.5億，副傷寒甲菌1.5億。

2.7菌苗分批

同組配合的原液用同批稀釋液在同一日稀釋的各瓶菌苗爲1批。大罐稀釋時應按大罐分批，並按分裝機分爲亞批。

2.8檢定

稀釋後每批應逐瓶抽樣進行無菌試驗及測定防腐劑含量（大罐稀釋時除外）。

2.9分裝

分裝後應每亞批抽樣送質量檢定部門進行成品檢定。

3.3 成品檢定

3.1物理化學檢查

菌苗應爲乳白色懸液，pH值爲6.8～7.4。不應有搖不散的菌塊或異物。苯酚含量應爲0.25%～0.5%（g　/ml）。

3.2菌形及純度

染色鏡檢，應爲革蘭氏陰性桿菌。至少觀察10個視野，平均每個視野內不得有10個以上非典型菌（線狀、粗大或染色可疑桿菌），並不應有雜菌。

3.3無菌試驗

按《生物製品無菌試驗規程》進行。

3.4安全試驗

3.4.1毒性試驗

用體重18～20g之健康小白鼠5只，每隻腹腔注射菌苗0.5ml，或用體重350～450g之健康豚鼠2只，腹腔注射菌苗1.5ml，觀察7日，應無死亡。

3.4.2防腐劑試驗

用體重18～20g之健康小白鼠2只，每隻皮下注射菌苗0.5ml，用苯酚作防腐劑的菌苗注射的小白鼠可發生戰慄症狀，但不應超過半小時，觀察7日不得有局部膿腫或死亡。

3.4 保存與效期

應保存於2～8℃。自稀釋之日起效期爲1年半。如原液保存超過1年稀釋，應相應縮短效期（自原液採集之日起總效期不得超過2年半）。

4 傷寒、副傷寒甲二聯菌苗使用說明書

本品系用傷寒、副傷寒甲菌分別培育，取菌苔製成懸液經甲醛殺菌，以磷酸鹽緩衝生理鹽水稀釋製成。用於預防傷寒、副傷寒甲。

本品爲乳白色的混懸液，含苯酚防腐劑，不應含有異物或搖不散的凝塊。

4.1 接種對象

重點使用於部隊、港口、鐵路沿線工地的工作人員，下水道、糞便、垃圾處理人員，飲食行業、醫務防疫人員及水上居民，或有本病流行地區的人羣。

4.2 用法

1.於上臂外側三角肌附着處皮膚經消毒後皮下注射。

2.初次注射本菌苗者，需注射3次，每次間隔7～10天。注射劑量如下：

1～6週歲：第1針0.2ml，第2針0.3ml，第3針0.3ml。

6週歲以上～14週歲：第1針0.3ml，第2針0.5ml，第3針0.5ml。

14週歲以上：第1針0.5ml，第2針1.0ml，第3針1.0ml。

4.3 禁忌

1.發熱，嚴重心臟病，高血壓，肝、腎臟病及活動性結核。

2.孕婦，月經及哺乳期。

3.有過敏反應病史者。

4.4 注意事項

1.用前搖勻。安瓿有裂紋，有異物、搖不散的凝塊或曾經凍結者都不能使用。

2.應備有1∶1000腎上腺素，以供偶有發生休克時急救之用。

4.5 反應

局部可出現紅腫，有時全身有寒熱或頭痛。

4.6 保存

保存於2～8℃暗處。

5 參考資料

1. ^ [1] ．"《中國生物製品規程》"．