3 皮內注射用卡介苗藥典標準
3.1 品名
3.1.1 中文名
3.1.2 漢語拼音
Pinei Zhusheyong Kajiemiao
3.1.3 英文名
BCG Vaccine for Intradermal Injection
3.2 定義、組成及用途
本品系用卡介菌經培養後，收集菌體，加入穩定劑凍乾製成。用予預防結核病。
3.3 1 基本要求
生產和檢定用設施、原材料及輔料、水、器具、動物等應符合“凡例”的有關要求。
卡介苗生產車間必須與其他生物製品生產車間及實驗窒分開。所需設備及器具均須單獨設置並專用。卡介苗製造、包裝及保存過程均須避光。
從事卡介苗製造的工作人員及經常進入卡介苗製造室的人員，必須身體健康，經X射線檢查無結核病，且每年經X射線檢查1～2次，可疑者應暫離卡介苗的製造。
3.4 2 製造
3.4.1 2.1 菌種
3.4.1.1 2.1.1 名稱及來源
採用卡介菌D2PB 302菌株。嚴禁使用通過動物傳代的菌種製造卡介苗。
3.4.1.2 2.1.2 種子批的建立
3.4.1.3 2.1.3 種子批的傳代
3.4.1.4 2.1.4 種子批的檢定
3.4.1.4.1 2.1.4.1 培養特性
卡介菌在蘇通培養基上生長良好，培養溫度在37～39℃之間。抗酸染色應爲陽性。在蘇通馬鈴薯培養基上培養的卡介菌應是幹皺成團略呈淺黃色。在牛膽汁馬鈴薯培養基上爲淺灰色黏膏狀菌苔。在雞蛋培養基上有突起的皺型和擴散型兩類菌落，且帶淺黃色。在蘇通培養基上卡介菌應浮於表面，爲多皺、微帶黃色的菌膜。
3.4.1.4.2 2.1.4.2 毒力試驗
用結核菌素純蛋白衍生物皮膚試驗（皮內注射0.2ml．含10IU）陰性、體重300～400g的同性豚鼠4只，各腹腔注射1ml菌液（5mg/ml），每週稱體重，觀察5周動物體重不應減輕；同時解剖檢查，大網膜上可出現膿皰，腸繫膜淋巴結及脾可能腫大，肝及其他臟器應無肉眼可見的病變。
3.4.1.4.3 2.1.4.3 無有毒分枝桿菌試驗
用結核菌素純蛋白衍生物皮膚試驗（皮內注射0.2ml，含10IU）陰性、體重300～400g的同性豚鼠6只，於股內側皮下各注射1ml菌液（10mg/ml），注射前稱體重，注射後每週觀察1次注射部位及局部淋巴結的變化，每2周稱體重1次，豚鼠體重不應降低。6周時解剖3只豚鼠，滿3個月時解剖另3只，檢查各臟器應無肉眼可見的結核病變。若有可疑病竈時，應做塗片和組織切片檢查，並將部分病竈磨碎，加少量生理氯化鈉溶液混勻後，南皮下注射2只豚鼠，若證實系結核病變，該菌種即應廢棄。當試驗未滿3個月時，豚鼠死亡則應解剖檢查，若有可疑病竈，即按上述方法進行，若證實系結核病變，該菌種即應廢棄。若證實屬非特異性死亡，且豚鼠死亡1只以上時應複試。
3.4.1.4.4 2.1.4.4 免疫力試驗
用體重300～400g豚鼠8只，分成兩組各4只，免疫組經皮下注射0.2ml （1/10人用劑量）用種子批菌種製備的疫苗，對照組注射0.2ml生理氯化鈉溶液。豚鼠免疫後4～5周，經皮下攻擊103～104強毒人型結核分枝桿菌，攻擊後5～6周解剖動物，免疫組與對照組動物的病變指數及脾臟毒菌分離數的對數值經統計學處理，應有顯著差異。
3.4.1.5 2.1.5 種子批的保存
3.4.2 2.2 原液
3.4.2.1 2.2.1 生產用種子
啓開工作種子批菌種，在蘇通馬鈴薯培養基、膽汁馬鈴薯培養基或液體蘇通培養基上每傳1次爲1代。在馬鈴薯培養基培養的菌種置冰箱保存，不得超過2個月。
3.4.2.2 2.2.2 生產用培養基
生產用培養基爲蘇通馬鈴薯培養基、膽汁馬鈴薯培養基或液體蘇通培養基。
3.4.2.3 2.2.3 接種與培養
挑取生長良好的菌膜，移種子改良蘇通綜合培養基或經批准的其他培養基的表面，置37～39℃靜止培養。
3.4.2.4 2.2.4 收穫和合並
培養結束後，應逐瓶檢查，若有污染、溼膜、渾濁等情況應廢棄。收集菌膜壓幹，移入盛有不鏽鋼珠瓶內，鋼珠與菌體的比例應根據研磨機轉速控制在一適宜的範圍，並儘可能在低溫下研磨。加入適量無致敏原穩定劑稀釋，製成原液。
3.4.2.5 2.2.5 原液檢定
按3.1項進行。
3.4.3 2.3 半成品
3.4.3.1 2.3.1 配製
用穩定劑將原液稀釋成1.0mg／ml或0.5mg/ml，即爲半成品。
3.4.3.2 2.3.2 半成品檢定
按3.2項進行。
3.4.4 2.4 成品
3.4.4.1 2.4.1 分批
3.4.4.2 2.4.2 分裝與凍幹
應符合“生物製品分裝和凍幹規程”規定。分裝過程中應使疫苗液混合均勻。疫苗分裝後應立即凍幹，凍幹後應立即封口。
3.4.4.3 2.4.3 規格
按標示量復溶後每瓶1ml（10次人用劑量），含卡介菌0.5mg；按標示量復溶後每瓶0.5ml（5次人用劑量），含卡介菌0.25mg。每1mg卡介菌含活菌數應不低於1.0×106CFU。
3.4.4.4 2.4.4 包裝
3.5 3 檢定
3.5.1 3.1 原液檢定
3.5.1.1 3.1.1 純菌檢查
3.5.1.2 3.1.2 濃度測定
用國家藥品檢定機構分發的卡介苗參考比濁標準，以分光光度法測定原液濃度：
3.5.2 3.2 半成品檢定
3.5.2.1 3.2.1 純菌檢查
按3.1.1 項進行。
3.5.2.2 3.2.2 濃度測定
按3.1.2 項進行。應不超過配製濃度的110%。
3.5.2.3 3.2.3 沉降率測定
將供試品置室溫下靜置2小時，採用分光光度法測定供試品放置前後的吸光度值（A580），計算沉降率，應≤20%。
3.5.2.4 3.2.4 活菌數測定
應不低於1.0×107CFU/mg。
3.5.2.5 3.2.5 活力測定
採用XTT法測定，將供試品和參考品稀釋至0.5mg/ml，取25μl分別加到培養孔中，於37～39℃避光培養24小時，檢測吸光度（A150），供試品吸光度應大於參考品吸光度。
3.5.3 3.3 成品檢定
除裝量差異、水分測定、活菌數測定和熱穩定性試驗外，按標示量加入滅菌注射用水，復溶後進行其餘各項檢定。
3.5.3.1 3.3.1 鑑別試驗
3.5.3.2 3.3.2 物理檢查
3.5.3.2.1 3.3.2.1 外觀
應爲白色疏鬆體或粉宋狀，按標示量加入注射用水，應在3分鐘內復溶至均勻懸液。
3.5.3.2.2 3.3.2.2 裝量差異
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅰ A），應符合規定。
3.5.3.3 3.3.3 水分
應不高於3.0%（2010年版藥典三部附錄Ⅶ D）。
3.5.3.4 3.3.4 純菌檢查
按3.1.1項進行。
3.5.3.5 3.3.5 效力測定
用結核菌素純蛋白衍生物皮膚試驗（皮內注射0.2ml，含10IU）陰性、體重300～400g的同性豚鼠4只，每隻皮下注射0.5mg供試品，注射5周後皮內注射TB-PPD 10IU/0.2ml，並於24小時後觀察結果，局部硬結反應直徑應不小於5mm。
3.5.3.6 3.3.6 活菌數測定
每亞批疫苗均應做活菌數測定。抽取5支疫苗稀釋並混合後進行測定，培養4周後含活菌數應不低於1.0×106CFU/mg。本試驗可與熱穩定性試驗同時進行。
3.5.3.7 3.3.7 無有毒分枝桿菌試驗
選用結核菌素純蛋白衍生物皮膚試驗（皮內注射0.2ml．含10IU）陰性、體重300～400g的同性豚鼠6只，每隻皮下注射相當於50次人用劑量的供試品，每2周稱體重一次，觀察6周，動物體重不應減輕；同時解剖檢查每隻動物，若肝、脾、肺等臟器無結核病變，即爲合格。若動物死亡或有可疑病竈時，應按2.1.4.3項進行。
3.5.3.8 3.3.8 熱穩定性試驗
取每亞批疫苗於37℃放置28天測定活菌數，並與2～8℃保存的同批疫苗進行比較，計算活菌率；放置37℃的本品活菌數應不低於置2～8℃本品的25%，且不低於2.5×105CFU/mg。
3.5.3.9 3.3.9 稀釋劑
3.6 4 保存、運輸及有效期
於2～8℃避光保存和運輸。自生產之日起，按批准的有效期執行。
3.7 5 使用說明
【藥品名稱】
通用名稱：皮內注射用卡介苗
英文名稱：BCG Vacdne for Intradermal Injection
漢語拼音：Pinei Zhusheyong Kajiemiao
【成分和性狀】
本品系用卡介菌經培養後收集菌體，加入穩定劑凍乾製成。爲白色疏鬆體或粉末，復溶後爲均勻懸液。
有效成分：卡介菌活菌體。
【接種對象】
出生3個月以內的嬰兒或用5IU PPD試驗陰性的兒童（PPD試驗後48～72小時局部硬結在5mm以下者爲陰性）。
【作用與用途】
【規格】
按標示量復溶後每瓶1.0ml（10次人用劑量），禽卡介菌0.5mg;按標示量復溶後每瓶0.5ml（5次人用劑量），含卡介菌0.25mg。每1mg卡介菌含活菌數應不低於1.0×106CFU。
（1） 10次人用劑量卡介苗加入1ml所附稀釋劑，5次人用劑量卡介苗加入0.5ml所附稀釋劑，放置約1分鐘，搖動使之溶解並充分混勻。疫苗溶解後必須在半小時內用完。
（2）用滅菌的1ml藍心注射器（25～26號針頭）吸取搖勻的疫苗，在上臂外側三角肌中部略下處皮內注射0.1ml。
【不良反應】
常見不良反應：
（1）接種後2周左右，局部可出現紅腫浸潤，若隨後化膿，形成小潰瘍，一般8～12周後結痂。一般不需處理，但要注意局部清潔，防止繼發感染。膿皰或淺表潰瘍可塗1%甲紫（龍膽紫），使其乾燥結痂，有繼發感染者，可在創面撒佈消炎藥粉，不要自行排膿或揭痂。
（2）局部膿腫和潰瘍直徑超過10mm及長期不愈（大於12周），應及時診治。
（3）淋巴結反應：接種側腋下淋巴結（少數在鎖骨上或對側腋下淋巴結）可出現輕微腫大，一般不超過10mm，1～2個月後消退。如通局部淋巴結腫大軟化形成膿皰，應及時診治。
（4）接種疫苗後可出現一過性發熱反應。其中大多數爲輕度發熱反應，持續1～2天后可自行緩解，一般不需處理；對於中度發熱反應或發熱時間超過48小時者，可給予對症處理。
罕見不良反應：
（1）嚴重淋巴結反應：在臨牀上分爲乾酪性、膿腫型、竇道型等。接種處附近如腋下、鎖骨上下或頸部淋巴結強反應，局部淋巴結腫大軟化形成膿皰，應及時診治。
（2）複種時偶見瘢痕疙瘩。
極罕見不良反應：
（1）骨髓炎。
【禁忌】
（1）已知對該疫苗的任何成分過敏者。
（2）患急性疾病、嚴重慢性疾病、慢性疾病的急性發作期和發熱者。
（5）妊娠期婦女。
【注意事項】
（1）嚴禁皮下或肌內注射！
（2）接種卡介苗的注射器應專用，不得用作其他注射，以防止產生化膿反應。
（3）以下情況者慎用：家族和個人有驚厥史者、患慢性疾病者、有癲癇史者、過敏體質者、哺乳期婦女。
（5）疫苗瓶有裂紋、標籤不清或失效者、疫苗復溶後出現渾濁等外觀異常者均不得使用。
（6）疫苗開啓後應立即使用，如需放置，應置2～8℃，並於半小時內用完，剩餘均應廢棄。
（7）應備有腎上腺素等藥物，以備偶有發生嚴重過敏反應時急救用。接受注射者在注射後應在現場觀察至少30分鐘。
（8）注射免疫球蛋白者，應至少間隔1個月以上接種本品，以免影響免疫效果。
（9）嚴禁凍結。
（10）使用時應注意避光。
【貯藏】
於2～8℃避光保存和運輸。
【包裝】
【有效期】
按批准的有效期執行。
【執行標準】
【批准文號】
【生產企業】
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傳真號碼：
網 址：
3.8 版本
《中華人民共和國藥典》2010年版