3 概述
溶菌是一種廣泛分佈於動植物的組織、體液與分泌物中的鹼性蛋白質。分佈在人體的各種組織、器官、血液和尿液中,其中淚液含量最高。血清溶菌酶主要來源於中性粒細胞、單核細胞及巨噬細胞的溶酶體中,而淋巴細胞、血小板、紅細胞、嗜酸粒細胞、嗜鹼粒細胞、原淋巴細胞與原粒細胞均無溶菌酶活性。溶菌酶的功能是使細菌壁破裂,對變形桿菌、痢疾桿菌、大腸埃希菌、傷寒桿菌等革蘭陰性桿菌均有作用,但主要是對革蘭陽性細菌如葡萄球菌、肺炎球菌、氣性壞疽桿菌與破傷風桿菌等作用明顯。
4 尿溶菌酶的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 化驗取材
4.4 尿溶菌酶的測定原理
4.5 試劑
(1)pH6.6 0.06mol/L磷酸緩衝液:甲液:KH2PO4(GR級)4.5g,加蒸餾水至500ml,溶解。乙液:Na2HPO4·12H2O(GR級)12g,加蒸餾水至500ml,溶解。甲液320ml加乙液180ml,混勻,調整pH,4℃保存。
(2)腐生性微球菌:腐生性微球菌菌種每月用營養瓊脂移種1次,瓊脂pH必須調至6.8~7.0。
(3)幹菌粉製備:將腐生性微球菌24h培養物,用大約40倍體積鹽水洗下,3000r/min離心20~30min,棄去上清液。將洗過的菌液沉澱,加入約5倍體積丙酮,用玻棒攪勻,放冰箱30min。取出,離心沉澱,棄去上清液,按此法用丙酮洗3次,再用乙醚洗2次,將菌液沉澱真空抽乾,或放乾燥器中過夜,即可德干菌粉,用乳鉢研細備用。
(4)平板製備:在0.06mol/L磷酸緩衝液中,加入瓊脂使成10g/L濃度,加熱至60~70℃,溶解後,加幹菌粉0.5g/L攪成均一基質混懸液,煮沸30min,在一直徑爲150mm的平皿中加入瓊脂液15ml,加蓋後放置冰箱。
4.6 操作方法
(1)標準曲線製作:先配標準原液,在100ml容量瓶中加入結晶的溶菌酶(卵白)50mg,用0.06mol/L磷酸緩衝液稀釋至100ml溶解。然後將標準原液配成不同濃度,在上述平皿中,每隔20mm挖一直徑爲3mm的小槽,小槽中分別加入各種濃度的標準液,每槽20μl,37℃溫箱放10~12h,取出後量溶菌圈的直徑,以溶菌的濃度爲縱座標(對數軸),溶菌環直徑爲橫座標,用半對數紙製作標準曲線。
(2)標本測定:標本按上法加樣,尿加20μl,37℃溫箱放置10~12h,取出後量溶菌圈直徑,查標準曲線。
4.7 正常值
0~2mg/L。
4.8 化驗結果臨牀意義
升高:見於急性單核細胞性白血病、急性粒細胞白血病、慢性腎炎等。
(1)升高:急、慢性單核細胞性白血病(顯著增高)、急性粒細胞性白血病(中度升高)、真性紅細胞增多症、霍奇金病、多發性骨髓瘤、先天性白細胞顆粒異常綜合徵、結合病、腎病、侷限性腸炎、矽肺、細菌性腦膜炎、泌尿系感染、腎移植排斥反應等。
(2)降低:中性粒細胞減少伴骨髓增生功能低下,惡性組織細胞增生症、毛細胞性白血病均可降低、正常或中度升高,急、慢性淋巴細胞性白血病降低或正常。
4.9 附註
急性淋巴細胞白血病病人在病情緩解、血象改善的同時,尿液中溶菌酶也有回升傾向,血清和尿液溶菌酶測定對白血病療效觀察是一項較好指標。