3 概述
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）可水解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷，也能水解β-N-乙酰氨基半乳糖苷。該酶廣泛存在於各種組織器官、體液、血細胞中，是溶酶體中的一種酸性水解酶。其測定方法有比色法和熒光光度法。
4 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的測定原理
（1）對硝基酚比色法：NAG可使底物對硝基酚-N-乙酰-β-D氨基葡萄糖水解，釋放出遊離的對硝基酚，在鹼性溶液中顯色，其顏色深淺與酶活力有關。
（2）熒光光度法：NAG可使熒光底物4-甲基傘形酮N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷水解，釋放出遊離的4-甲基傘形酮（4-MU），後者在鹼性條件下變構，受激發產生熒光，其熒光強度可反
4.4 試劑
①50mmol/L枸櫞酸鹽緩衝液（pH4.6）：稱枸櫞酸（C6H3O7·H2O）5.4g，枸櫞酸三鈉（Na3C6H5O7·2H2O）10g，用蒸餾水溶解後稀釋至1000ml。
②10mmol/L底物緩衝液：稱對硝基苯N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷342.3mg，用上述緩衝液稀釋至100ml，混勻，4℃冰箱可保存10天。
③50mmol/L硼砂-氫氧化鈉緩衝液（pH9.8）：稱硼砂（Na2B407·H2O）4.77g，用蒸餾水溶解，加0.2mmol/L NaOH 170ml，再用蒸餾水稀釋至1000ml。
④3mmol/L對硝基酚標準液：取純化的對硝基酚41.7mg，用蒸餾水溶解並稀釋至100ml，混勻後置冰箱保存。
（2）熒光光度法：
①枸櫞酸-磷酸鹽緩衝液（pH4.5）：12.6g/L枸櫞酸· H2O（60mmol/L）和13.5g/L無水碳酸氫鈉（95mmol/L）各50ml，混合測pH應爲4.5。取已配好的上述緩衝液（枸櫞酸30mmol/L，磷酸鹽47.5mmol/L）50ml，加疊氮鈉10mg，牛血清白蛋白50mg，溶解，4℃冰箱可穩定數週，混濁應棄去，此爲含牛血清白蛋白的緩衝液。
②2mmol/L底物緩衝液：稱4-甲基傘形酮-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（MW：
379.4）7.6mg，溶入10ml含牛血清白蛋白緩衝液中，分裝於具塞試管內，－20℃可保存數月，忌反覆凍融。
③酶反應終止液（pH10.4）：稱甘氨酸37.5g，溶於1000ml蒸餾水中，加入920ml 0.5mol/L NaOH，用0.5mol/L NaOH調pH至10.4。
④300μmol/L 4-MU標準液：稱4-MU 11mg，用終止液溶解並稀釋至250ml，此爲貯存液。置棕色瓶4℃保存，至多穩定10天。
4.5 操作方法
混合，在405nm波長，1cm光徑，蒸餾水調零，讀取各管吸光度，用（AU-AC）之差查標準曲線。
①基質對硝基酚應純化，配製前置50℃烘24h。用10mmol/L NaOH配成0.04mmol/L濃度，用窄帶寬分光光度計掃描吸收曲線，λmax＝401nm，根據IFCC標準，Aλmax＝0.7316～0.7388，Eλmax＝18380±90（25℃）。根據對硝基酚的摩爾吸光係數，計算NAG活性單位的公式爲：
以上公式是根據IFCC的標準E值計算的，各實驗室應根據具體儀器條件測定E值，建立計算式。
②底物溶解度小，配製時應先用適量pH 4.6緩衝液調成糊狀，再逐漸加緩衝液至所需量。
③測定結果超線性範圍時，應將標本用生理鹽水稀釋後重測，結果乘以稀釋倍數。
④尿酶濃度受尿量影響較大，應留取24h尿量。若以NAG/g肌酐比值計算酶排出率，即不受尿濃縮或稀釋的影響，又不需留24h尿。
（2）熒光光度法：先將血清或尿用不含牛血清白蛋白（BSA）的緩衝液作20倍稀釋，按表2操作。
混勻，激發波長364nm，發射波長448nm，以終止液調零，6μmol/L 4-MU管調熒光強度至100後，分別測空白管及測定管的熒光強度。
②也可用上海第三分析儀器廠產930熒光光度計，激發濾光片360，發射濾光片用（400＋450）複合，效果滿意。
③本法酶反應液中各成分濃度爲：底物1.33mmol/L，枸櫞酸20mmol/L，Na2HPO432mmol/L。
④配試劑所用溶劑應用重蒸餾水，底物應無遊離4-MU，BSA中應無該酶或用50℃加熱2h滅活。
⑤血清中NAG於4℃穩定數小時至數天，－20℃可穩定數月。尿標本4℃穩定1周，也可用枸櫞酸鹽抗凝血漿。
⑥β-N-乙酰氨基葡萄糖苷可被二種酶催化水解，一種是β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（EC 3.2.1.30），另一種是β-N-乙酰已糖苷酶（EC 3.2.1.52），只有對提純的酶才能限定EC 3.2.1.30或EC 3.2.1.52。目前國內文獻中常稱的NAG，嚴格地說是按所用底物命名的，而不是指酶對底物的特異性。所以目前國外文獻常泛稱β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。
4.6 正常值
（1）對硝基酚比色法：血清NAG：21.54±6.4U/L，尿液NAG呈正態分佈，中位數爲9.13U/g肌酐，第95百分位數上限爲16.10U/g肌酐。
（2）熒光光度法：
成人血清9.94±2.O7U/L。
成人尿液6.39±3.19U/L Cre。
4.7 化驗結果臨牀意義
血、尿NAG活性測定對反映腎實質病變，尤其是急性損傷和活動期病變更
（1）腎小管疾病：重金屬（汞、鉛、鎘等）及藥物性腎損傷、缺血、缺氧、失血、休克等均可引起NAG活性增加。
（2）腎病綜合徵：尿NAG常明顯增加，緩解期下降，復發時迅速回升，故可作爲臨牀觀察指徵。腎小球腎炎急性期變化較大，但與腎小管損傷相比，變化幅度較小。
（3）尿路感染的定位診斷：急、慢性腎盂腎炎尿NAG上升，能與單純性膀胱炎區別。可用於早期上尿路感染的診斷。
（4）腎移植排斥反應的監測：腎移植排斥反應早期NAG即可升高，比尿蛋白、血肌酐、肌酐清除率更敏感。
（5）糖尿病腎痛早期診斷：糖尿病腎腎病尿NAG升高，用於本病的早期診斷優於尿白蛋白及β2-微球蛋白。
4.8 附註
①基質對硝基酚應純化，配製前置50℃烘24h。用10mmol/L NaOH配成0.04mmol/L濃度，用窄帶寬分光光度計掃描吸收曲線，λmax＝401nm，根據IFCC標準，Aλmax＝0.7316～0.7388，Eλmax＝18380±90（25℃）。根據對硝基酚的摩爾吸光係數，計算NAG活性單位的公式爲：
以上公式是根據IFCC的標準E值計算的，各實驗室應根據具體儀器條件測定E值，建立計算式。
②底物溶解度小，配製時應先用適量pH 4.6緩衝液調成糊狀，再逐漸加緩衝液至所需量。
③測定結果超線性範圍時，應將標本用生理鹽水稀釋後重測，結果乘以稀釋倍數。
④尿酶濃度受尿量影響較大，應留取24h尿量。若以NAG/g肌酐比值計算酶排出率，即不受尿濃縮或稀釋的影響，又不需留24h尿。
（2）熒光光度法：
②也可用上海第三分析儀器廠產930熒光光度計，激發濾光片360，發射濾光片用（400＋450）複合，效果滿意。
③本法酶反應液中各成分濃度爲：底物1.33mmol/L，枸櫞酸20mmol/L，Na2HPO432mmol/L。
④配試劑所用溶劑應用重蒸餾水，底物應無遊離4-MU，BSA中應無該酶或用50℃加熱2h滅活。
⑤血清中NAG於4℃穩定數小時至數天，－20℃可穩定數月。尿標本4℃穩定1周，也可用枸櫞酸鹽抗凝血漿。
⑥β-N-乙酰氨基葡萄糖苷可被二種酶催化水解，一種是β-N-乙酰氨基葡萄糖苷苷酶（EC 3.2.1.30），另一種是β-N-乙酰已糖苷酶（EC 3.2.1.52），只有對提純的酶才能限定EC 3.2.1.30或EC 3.2.1.52。目前國內文獻中常稱的NAG，嚴格地說是按所用底物命名的，而不是指酶對底物的特異性。所以目前國外文獻常泛稱β-N-乙酰氨基葡萄糖苷苷酶。