3 概述
正常人的血小板爲圓形或橢圓形小體,直徑只有2~3μm。血小板離體後極易聚集,變性破壞,而且不易與其它小顆粒區別,所以計數較難獲得準確的結果。血小板計數分直接計數與間接計數二種。間接計數是根據血小板與紅細胞兩者之比求出血小板的數目,準確性差,臨牀已很少使用。直接計數有血小板自動計數儀計數和目視法計數二類,前者在血細胞自動計數節介紹。目視法是目前基層醫療單位使用最廣泛的方法。現介紹目視法直接計數。
6 血小板計數的測定原理
同紅細胞計數。所用的稀釋液有兩類。一類不破壞紅細胞,以檸檬酸鈉甲醛液爲代表,其優點是當血稀釋100~200倍時,可同時做紅細胞計數,缺點是血小板混雜在大量紅細胞之間,計數時容易遺漏。在血小板顯著減少的情況下這種方法更不適用。另一類稀釋液能破壞紅細胞,如尿素稀釋液、草酸銨稀釋液,由於紅細胞完全被溶解,視野較清晰,計數方便,稀釋倍數可低至20,誤差範圍較小,尤其適用於血小板減少患者。缺點是如經驗不足可能把紅細胞碎片誤認爲血小板。我國目前多選用後一類稀釋液。在不破壞紅細胞的稀釋中應考慮加入等滲劑、抗凝劑及固定防腐劑以保證紅細胞等滲不易發生沉澱,有效地阻止血凝,很快將血小板固定,防止形態改變及污染等。而在破壞紅細胞的稀釋液中主要應加入溶血劑,並要求將紅細胞破壞完全。
7 試劑
稀釋液的種類很多,現將常用的介紹如下:
(2)草酸銨稀釋液:
過濾後保存於4℃。草酸銨對紅細胞破壞力較強,血小板形態完整。尚有報道改良液(即原液基礎上加EDTA-Na20.2g、甲醛0.1ml、草酸銨可改爲0.5g或仍爲1.0g)。
(3)尿素(許汝和)稀釋液:
先將分析純檸檬酸鈉加入蒸餾水中,再加甲醛;然後在另一量筒內置尿素10g,將上述檸檬酸鈉液加至100ml,溶解後過濾,保存於冰箱內備用。
尿素稀釋液對個別人的紅細胞溶解不完全,尿素易於分解,一般只能使用10天,放在冰箱內一般也不應超過1個月。尚有報道改良液(即原液中去掉40%甲醛、也有同時將尿素增至13g並在過濾後加氯仿數滴)改良液破壞紅細胞較完全。
蒸餾水 20ml
先將分析純檸檬酸鈉和氯化汞加熱溶解於60ml蒸餾水中;然後將高鐵氰化鉀0.5g在另一容器中用20ml蒸餾水加熱溶解,加入上液中,繼續加熱,使其黃色變爲深黃綠色,最後呈黃色爲止。冷卻後,再加蒸餾水至100ml,置冰箱中備用。
赤血鹽稀釋液不易分解,在室溫中可放置1年以上,但破壞紅細胞不太完全。
據報道尚有以下稀釋液可參考
(5)鹽酸普魯卡因稀釋液:
鹽酸普魯卡因 2g
蒸餾水 加至100ml
甲液 熒光黃鈉(fluoresceinsodium) 1g
石炭酸(AR) 10g
蒸餾水 加至100ml
此液呈黃紅色
乙液 檸檬酸鈉(AR) 3.8g
蒸餾水 100ml
溶解後再加甲液 0.5ml。
此液呈極強的黃綠色熒光,過濾置冰箱備用。本試劑不破壞紅細胞,血小板在試劑中很穩定,形態圓而整齊,折光率一致亮而透明,視野清楚,同時能夠
計數紅細胞。
8 操作方法
(1)試管內加0.38ml稀釋液。
(2)取血20μl,與上述稀釋液混勻。
(3)靜止3~5min,待紅細胞完全溶解後再搖勻(指破壞紅細胞的稀釋液),然後取少量混懸液滴入計數板內。
10 化驗結果臨牀意義
(1)生理變異:健康人的血小板數比較穩定,在一日之間沒有大的變動。亦無性別與年齡明顯差別。有些婦女血小板可呈週期性(月經期)輕度下降。
(2)病理意義:血小板減少見於原發性血小板減少性紫癜。某些內科疾患如膠原性疾患、脾功能亢進、尿毒症、腫瘤骨髓轉移引起骨髓纖維化時可繼發血小板減少。某些造血系統疾患如白血病、再生障礙性貧血、溶血性貧血、骨髓增生異常綜合徵等均可伴有血小板減少。凡體內血小板消耗過多,如彌散性血管內凝血及血栓性血小板減少性紫癜、敗血症、粟粒結核等血小板也往往減少。
血小板顯著增多主要見於原發性血小板增多症、真性紅細胞增多症、慢性粒細胞白血病以及腫瘤骨髓轉移(有溶骨性變化時)。在脾切除手術後,血小板也能呈現一過性增多。此外,骨折、出血和手術後,血小板可反應性輕度增高。