3 概述
血清肌紅蛋白（Mb）存在於心肌與其他肌肉組織中，其分子量爲17500D，Mb是急性心肌梗死（AMI）病人升高的最早標誌物之一，2～4h血中濃度就可以升高，6～10h幾乎所有AMI患者Mb都升高，因此Mb陽性特別有助於早期AMI的診斷。Mb很快從血中清除，在發病24h內可恢復到正常，所以Mb陰性特別有助排除AMI病程中觀察有無梗死擴展。Mb測定方法有RIA、ELISA、免疫比濁法等，但由於Mb在AMI診斷中爲急診項目，近年來出現多種適合急診的技術，其中免疫比濁法能在10min內完成測定。
4 血清肌紅蛋白的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 血清肌紅蛋白的測定原理
（1）ELISA法：樣品中的Mb和酶標Mb與Mb抗體競爭結合，酶標Mb-Mb抗體複合物中的辣根過氧化物酶作用於底物（OPD-H2O2）產生有色物質，顏色深淺與樣品中Mb濃度成反比，查半對數座標曲線即得樣品Mb濃度。
（2）RIA法：血清中的Mb和125Ⅰ-Mb在緩衝液中共同競爭性的與抗體結合。加入PR分離劑，125Ⅰ-Mb-抗體複合物和抗兔IgG結合而沉澱，經離心分離，測沉澱物的放射性，計算各標準濃度點的B/B0%。從標準曲線上可得出血清中Mb濃度。
4.5 試劑
（1）ELISA法：
①PB溶液：0.02mol/L PB，PH7.2。
②1%正常兔血清：用含有0.2%戊二醛的PB溶液將正常兔血清稀釋成1%。
③4%正常人血清：用含有0.1g/L硫柳汞的PB溶液把正常人血清稀釋成4%。
④包被液：用含有0.2%戊二醛的PB溶液把Mb抗體配成30μg/mL。
⑤洗滌液：配成含有0.05% Tween20的PB溶液。
⑥稀釋液：牛血清白蛋白用含有0.1g/L硫柳汞的PB溶液配成1g/L。
⑦底物溶液：取鄰苯二胺40mg加入pH5.0磷酸鹽-檸檬酸緩衝液（0.1mol/L檸檬酸24.3ml，加0.2mol/L Na2HPO425.7ml混合）至100ml，臨用前加H2O20.15ml。
⑧酶標Mb溶液：用稀釋液把乾燥酶標Mb配成200ng/ml。
⑨標準Mb：酶標Mb和Mb抗體有商品供應。
（2）RIA法：
①50mmol/L pH7.4PBS。
②抗血清：取經提取，純化和鑑定的人Mb，按每隻新西蘭兔1mg於1ml蒸餾水中，加1ml福氏完全佐劑乳化，按常規方法免疫獲得抗血清。滴度可達1∶30000，和血清中蛋白質及Hb無交叉反應。按可供測100管量分裝，冷凍乾燥，用前加10.5ml PBS溶解。
③125Ⅰ-Mb取高純度的人Mb10μg/10μl，採用Bolten-Hunter聯接法標記125Ⅰ。測定免疫活性，分裝每瓶74KBq（2μCi），冷凍乾燥。用前加11mlPBS溶解。
④標準人Mb濃度：取人Mb液，用正常羊血清或20g/L BSA稀釋成25、50、100、200μg/L，分裝每瓶0.5ml，冷凍乾燥。用前加0.5ml蒸餾水溶解。
⑤PR試劑：用驢抗兔IgG抗血清製備。
4.6 操作方法
（1）ELISA法：取一清潔乾燥聚丙乙烯微孔反應板，標明空白、標準和測定，按以下步驟進行：
①空白對照孔加入200μl%正常兔血清，其餘孔各加入200μl包被液（內含Mb抗體），37℃放置30min，再置4℃過夜，棄去上層液，用洗滌液洗3次，每次放室溫3min。
②空白對照孔加入100μl14%正常人血清；標準孔各加入5、10、20、40、80、160、320ng/ml的標準Mb溶液（用稀釋液配成）20μl，再加入4%正常人血清，測定孔加入20μl樣品血清，再加入4%正常人血清8μl。每孔各加入100μl酶標Mb溶液，置37℃1h，棄去溶液，用洗滌液洗3次。
③每孔各加入200μl底物溶液，37℃15min（避光顯色）。
④每孔加入2mol/L H2SO4以終止反應，振盪1min，放置室溫10min，以空白對照孔調零，在492nm處讀取各孔吸光度。
（2）RIA法：
①取10×75mm塑料試管，零標準管加20g/L BSA液0.1ml，標準管（S1～4）加標準液0.1ml，測定管加待測血清0.1ml。每管各加抗血清0.1ml，混合後放37℃，水浴中20min。
②每管各加125Ⅰ-Mb液0.1ml，混合，放37℃水浴中20min，再向各管加PR試劑0.5ml，繼續放37℃水浴中30min。
③離心（3500r/min）15min。棄去上清液，在自動γ免疫計數器上測放射性。
④以B/B0%爲縱座標，相對應的標準Mb濃度爲橫座標，繪製標準曲線。根據樣品管的B/B0%，從標準曲線上查得樣品中Mb濃度。
4.7 正常值
（1）ELISA法：3.5～22.8ng/ml。
（2）RIA法：健康成人血清29±16.3μg/L。
4.8 化驗結果臨牀意義
（1）測定血清中的Mb是早期診斷急性心肌梗死的敏感指標；從胸痛發作後12h取血，血清Mb就出現升高，此時CK和AST正常。發病24h達高峯。
（2）心臟外科手術病人血清Mb升高，可以作爲判斷心肌損傷程度及癒合情況的一個重要客觀指標。
（3）在臨牀肌病研究中發現假性肥大型肌營養不良病人血清Mb升高；最高可達1150μg/L。
4.9 附註
劇烈運動、肌內注射、肌肉創傷、心導管術等。也可使肌紅蛋白升高。