3 皮上劃痕人用布氏菌活疫苗藥典標準
3.1 品名
3.1.1 中文名
3.1.2 漢語拼音
Pishang Huahen Renyong Bushijun Huoyimiao
3.1.3 英文名
Brucellosis Vaccine （Live） for PercutaneousScarification
3.2 定義、組成及用途
本品系用布氏菌的弱毒菌株經培養、收集菌體加入穩定劑後凍乾製成。用於預防布氏菌病。
3.3 1 基本要求
生產和檢定用設施、原材料及輔料、水、器具、動物等應符合“凡例”的有關要求。
3.4 2 製造
3.4.1 2.1 菌種
生產用菌種應符合“生物製品生產檢定用菌毒種管理規程”的有關規定。
3.4.1.1 2.1.1 名稱及來源
採用牛布氏菌的弱毒菌株104M株。
3.4.1.2 2.1.2 種子批的建立
3.4.1.3 2.1.3 種子批的傳代
3.4.1.4 2.1.4 種子批的檢定
3.4.1.4.1 2.1.4.1 培養特性
3.4.1.4.2 2.1.4.2 染色鏡檢
3.4.1.4.3 2.1.4.3 變異檢查
用生理氯化鈉溶液將新鮮培養物製成含菌2.5×109～3.0×109/ml的菌懸液，置90℃水浴中30分鐘，不應出現凝集現象。用同濃度的菌懸液與1:1000三勝黃素水溶液等量混合，於37℃放置24小時，不應出現凝集現象。用結晶紫染色檢查菌落，菌落變異率不高於3%。
3.4.1.4.4 2.1.4.4 噬菌體裂解試驗
將菌種接種子肝瓊脂平皿，加入布氏菌Tb噬菌體1滴，於35～37℃培養44～48小時，噬菌體流過處應無本菌生長。
3.4.1.4.5 2.1.4.5 血清學試驗
用生理氯化鈉溶液將新鮮培養物製成含菌5.0×109/ml的菌懸液，與布氏菌參考血清做凝集反應，其凝集效價應達到血清原效價。
3.4.1.4.6 2.1.4.6 殘餘毒力檢查
用生理氯化鈉溶液將35～37℃培養44～48小時之肝瓊脂斜面新鮮培養物製成菌懸液，並稀釋成含菌1.5×109/ml、3.0×105/ml、6.0×109/ml、1.2×1010/ml和2.4×1010/ml等5個濃度的菌懸液。取體重18～20g小鼠25只分爲5組，各組分別用不同濃度的菌懸液腹腔注射，每隻0.5ml，觀察7天，計算LD50，應爲1.0×109～6.0×109個菌。
3.4.1.4.7 2.1.4.7 免疫力試驗
每3～5年至少做一次免疫力試驗。用生理氯化鈉溶液將菌種第1代新鮮培養物製成2.0×108/ml的菌懸液。取體重300～300g豚鼠10只，每隻皮下注射1ml，經25～30天后，每隻豚鼠皮下攻擊羊型強毒布氏菌10個或20個感染量（MID）。同時取3只豚鼠作對照，皮下注射1MID。免疫及對照豚鼠於注射毒菌懸液後均觀察25～30天后解剖，取出鼠腹股溝淋巴結、腹主動脈旁淋巴結、肝及脾，分別接種肝瓊脂中管斜面培養基，於35～37℃培養10天。如免疫動物組織之培養物有布氏菌生長，應用硫堇培養基（亦可用紙片法）和硫化氫反應做菌型鑑別試驗。對照組3只豚鼠都必須發生全身感染，即肝臟或脾臟應分離出羊型毒菌。免疫組攻擊10MID時，10只豚鼠中不應有2只以上分離出羊型毒菌；攻擊20MID時，10只豚鼠中不應有3只以上分離出羊型毒菌。
3.4.1.5 2.1.5 種子批的保存
3.4.2 2.2 原液
3.4.2.1 2.2.1 生產用種子
2.2.1.1 將工作種子批菌種啓開後，接種在肝瓊脂斜面或其他適宜培養基上，置35～37℃培養44～48小時爲第1代。第1代菌種須進行1: 500三勝黃素玻片凝集試驗，只有光滑型菌方可用於疫苗生產。第1代菌種斜面於2～8℃可保存15天。
2.2.1.2 將菌種接種到肝瓊脂或其他適宜培養基上，置35～37℃培養44～48小時，培養物經純菌檢查合格後，棄去凝固水，用無菌生理氯化鈉溶液製成菌懸液。由此製備適宜數量的生產用種子。
3.4.2.2 2.2.2 生產用培養基
3.4.2.3 2.2.3 菌種接種和培養
將第2代或第3代生產用種子接種在生產用培養基上，置35～37℃培養44～48小時，肉眼逐瓶檢查，有雜菌者應廢棄。
3.4.2.4 2.2.4 收穫
用含有蔗糖、明膠、硫脲和味精的穩定劑或其他適宜的穩定劑洗下菌苔或刮取菌苔於穩定劑內。數瓶培養物可採入或刮入1瓶（或1大管）穩定液內，即爲原液，置2～8℃保存。
3.4.2.5 2.2.5 原液檢定
按3.1項進行。
3.4.3 2.3 半成品
3.4.3.1 2.3.1 配製
將原液稀釋成每1ml含菌1.9×1011。由原液收穫到凍幹不得超過7天。
3.4.3.2 2.3.2 半成品檢定
按3.2項進行。
3.4.4 2.4 成品
3.4.4.1 2.4.1 分批
3.4.4.2 2.4.2 分裝與凍幹
應符合“生物製品分裝和凍幹規程”規定。分裝後應立即進行凍幹，真空封口，亦可充氮封口。
3.4.4.3 2.4.3 規格
按標示量復溶後每瓶0.5ml（10次人用劑量），含菌9.5×1010。每1次人用劑量含活菌數應不低於3.0×109。
3.4.4.4 2.4.4 包裝
3.5 3 檢定
3.5.1 3.1 原液檢定純菌檢查
按2010年版藥典三部附錄Ⅻ A方法做純菌檢查，生長物做塗片鏡檢，不得有雜菌。
3.5.2 3.2 半成品檢定純菌檢查
按3.1項進行。
3.5.3 3.3 成品檢定
除裝量差異和水分測定外，按標示量加入氯化鈉注射液，復溶後進行其餘各項檢定。
3.5.3.1 3.3.1 鑑別試驗
用特異血清做凝集試驗，應出現明顯凝集反應，或按2.1.4.4項進行。
3.5.3.2 3.3.2 物理檢查
3.5.3.2.1 3.3.2.1 外觀
應爲乳白色疏鬆體。按標示量加入生理氯化鈉溶液後應於1分鐘內復溶，並呈均勻懸液。
3.5.3.2.2 3.3.2.2 裝量差異
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅰ A），應符合規定。
3.5.3.3 3.3.3 水分
應不高於3.0%（2010年版藥典三部附錄Ⅶ D）。
3.5.3.4 3.3.4 純菌檢查
按3.1項進行。
3.5.3.5 3.3.5 菌型檢查
每亞批疫苗應用硫堇培養基（或紙片法）及硫化氫反應做菌型鑑別檢查，應呈牛布氏菌的培養特性。
3.5.3.6 3.3.6 濃度測定
用國家藥品檢定機構分發的濃度測定用參考品，以分光光度法測定濃度，每1次人用劑量應含菌數不高於1.1×1010。
3.5.3.7 3.3.7 活菌數測定及菌落變異檢查
將菌液濃度稀釋爲含菌1.0×103/ml，接種5個平皿，每個平皿接種0.1ml。用塗菌棒塗勻後置35～37℃培養4～5天，計算活菌數，每1次人用劑量含活菌數應不低於3.0×109；同時用結晶紫染色檢查菌落，菌落變異率不得超過10%。
3.5.3.8 3.3.8 效力測定
取每5批疫苗中的首批進行效力測定。將復溶後的本品用無菌生理氯化鈉溶液稀釋成含菌5.0×108/ml菌懸液。取體重300～350g豚鼠10只，每隻皮下注射Iml。經25～30天后，每隻豚鼠皮下攻擊羊型強毒布氏菌10MID或20MID。同時用3只豚鼠作對照，於皮下注射1MID。各組動物於注射毒菌懸液後25～30天解剖，取鼠腹股溝淋巴結、腹主動脈旁淋巴結、肝及脾，分別接種肝瓊脂中管斜面培養基，於37℃培養10天。如免疫動物組織之培養物有布氏菌生長，需用硫堇培養基（亦可用紙片法）和硫化氫反應做菌型鑑別試驗。對照組3只豚鼠都必須發生全身感染，即肝臟或脾臟應分離出羊型毒菌。攻擊10MID時．10只免疫豚鼠中不應有3只以上分離出羊型毒菌；攻擊20MID時，10只免疫豚鼠中不應有4只以上分離出羊型毒菌。
3.5.3.9 3.3.9 特異性毒性試驗
每亞批取3瓶，用體重18～20g小鼠5只，每隻皮下注射含菌1.0×109/ml的菌懸液0.5ml。觀察7天不應有死亡，如有死亡應複試一次，仍有死亡，爲不合格。
3.5.3.10 3.3.10 稀釋劑
3.6 4 保存、運輸及有效期
3.7 5 使用說明
【藥品名稱】
通用名稱：皮上劃痕人用布氏菌活疫苗
英文名稱：Brucellosis Vaccine （Live） for Percutaneous Scarification
漢語拼音：Pishang HUahen Renyong Bushijun Huoyimiao
【成分和性狀】
本品系用布氏菌的弱毒菌株經培養、收集菌體加入穩定劑後凍乾製成。爲乳白色疏鬆體，復溶後爲均勻懸液。
有效成分：布氏菌弱毒株活菌體。
【接種對象】
與布氏菌病傳染源有密切接觸者，每年應免疫一次。布氏菌素反應陽性者可不予接種。
【作用與用途】
【規格】
按標示量復溶後每瓶0.5ml（10次人用劑量），含菌9.5×1010。每1次人用劑量含活菌數應不低於3.0×109。
（1）每瓶加入0.5ml氯化鈉注射液，復溶後的疫苗應在1小時內用完，剩餘的疫苗應廢棄。
（2）上臂外側三角肌上部附着處皮上劃痕接種。在接種部位滴加疫苗，每1次人用劑量0.05ml，再用消毒針劃痕。劃痕長度爲1～1.5cm，應以劃破表皮微見血跡爲宜。劃痕處用針塗壓10餘次，使菌液充分進入劃痕內。接種後局部應裸露至少5分鐘。
（3） 10歲以下兒童及複種者疫苗滴於一處劃1個“井”字，10歲以上初種者疫苗滴於兩處劃2個“井”字，間隔2～3cm。
【不良反應】
常見不良反應：
（1）接種後24小時內，在注射部位可出現疼痛和觸痛，注射局部紅腫浸潤輕、中度反應，多數情況2～3天內自行消失。
（2）接種疫苗後可出現一過性發熱反應。其中大多數爲輕度發熱反應，持續1～2天后可自行緩解，一般不需處理；對於中度發熱反應或發熱時間超過48小時者，可給予對症處理。
罕見不良反應：
（2）注射局部重度紅腫或其他併發症，應給予對症處理。
極罕見不良反應：
【禁忌】
（1）已知對該疫苗的任何成分過敏者。
（2）患急性疾病、嚴重慢性疾病、慢性疾病的急性發作期和發熱者。
【注意事項】
（1）本品僅供皮上劃痕用，嚴禁注射！
（2）以下情況者慎用：家族和個人有驚厥史者、患慢性疾病者、有癲癇史者、過敏體質者、6個月以上的哺乳期婦女。
（3）疫苗瓶有裂紋、標籤不清或失效者、疫苗復溶後出現渾濁等外觀異常者均不得使用。
（4）疫苗開啓後應立即使用，如需放置，應置2～8℃，並於1小時內用完，剩餘均應廢棄。
（5）應備有腎上腺素等藥物，以備偶有發生嚴重過敏反應時急救用。接受注射者在注射後應在現場觀察至少30分鐘。
（6）注射免疫球蛋白者，應至少間隔1個月以上接種本品，以免影響免疫效果。
（8）消毒皮膚只可用酒精，不可用碘酒，並在酒精揮發後再行接種。
（10）本品爲減毒活疫苗，不推薦在該疾病流行季節使用。
（11）嚴禁凍結。
【貯藏】
於2～8℃避光保存和運輸。
【包裝】
【有效期】
12個月。
【執行標準】
【批准文號】
【生產企業】
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3.8 版本
《中華人民共和國藥典》2010年版