2 概述
痰脫落細胞學檢查是診斷某些呼吸系統疾病的重要方法。方法簡便，且不給病人帶來任何痛苦，可反複檢查。尤其診斷肺癌陽性率可達80%以上，其中診斷小細胞肺癌陽性率90%、鱗癌陽性率82.2%、腺癌陽性率69.4%、未分化癌陽性率71.4%，診斷假陽性率1.8%。中心型肺癌陽性率高於周邊型肺癌，分別爲82.9%和62.8%。痰細胞學檢查也可作爲判斷治療療效或早期復發的指標之一。但傳統的痰細胞學檢查易受取材、保存、製片、染色及檢查人員素質等因素的影響，靈敏度僅爲20%～30%，因此，改進痰細胞學的檢查方法是非常重要和必須的。
6 方法
1.痰標本採集。要求患者清晨收集肺深部咳出的痰。醫務人員必須認真指導患者如何從肺深部咳痰，咳痰前不能喫任何東西，最好先用清水漱口3次，以去除口腔雜物。之後做2～3次深呼吸，再用力咳嗽，將肺深部的痰咳出，遺棄第1口痰，留第2、3、4口痰做標本。如患者咳痰困難，可用3%～5%氯化鈉溶液霧化吸入，誘導痰液排出。目前多數醫院痰留置於乾淨的玻璃器內，或置於95%乙醇內。留置器皿內的痰應於1～2h內送化驗室。如不能及時送檢，則必須保存在4℃冰箱內。塗片要由有經驗的技術員進行，選擇帶血絲的痰或灰白色痰塊塗片，塗片要均勻，並立即置於固定液內，再用巴氏或蘇木素和伊紅（hematoxylin and eosin，HE）染色。置於乙醇的痰標本可送病理科，進行石蠟包埋後染色。
2.痰液收集方法已有很快進展，1963年Saccomanno建立了保存痰液的方法，已被廣泛應用於臨牀及肺癌篩查中。2000年協和醫院對Saccomanno法進行了相應改良，加入瞭解黏劑，使細胞學檢查陽性率有明顯提高。但長期保存有17.7%標本受損。
我院痰儲存固定常用50%乙醇和2%多聚乙醇的混合液。每個收集管內置固定液20ml，可留取7～8口痰，便於進行多項目檢查。已留痰的收集管立即保存於4℃冰箱。解黏處理這一步非常重要，否則將收集不到純脫落細胞，進行細胞形態及痰基因分析，目前解黏處理常用美國PROMEGA公司生產的DTT（DL Dithiothreitol），工作濃度爲5%，DTT可打斷黏蛋白之間的二硫鍵連接，而不損傷細胞。
20世紀90年代中期發展的液基細胞學與計算機輔助細胞學診斷系統（CCT）的應用，可使痰細胞學檢出的陽性率達97.1%。液基細胞學包括薄層細胞學檢測系統（TCT）和自動細胞學檢測系統（LCT），均已獲美國FDA批准，應用於臨牀。可將痰標本中的黏液、血液和炎性細胞分離，收集痰脫落細胞製成薄片，用於細胞學檢測，使痰的採集、製片、染色等步驟實現標準化和自動化，並應用計算機技術，對痰塗片給予分析，提高了精確度。
3.留取痰次數。一般認爲送檢4～6次，據報道1、2、3、4次的陽性率分別爲47.2%、72.7%、84.5%、91.5%。當晚期中心型肺癌支氣管完全阻塞或合併氣道感染時，腫物表面有多量壞死物及膿痂，痰細胞學往往呈陰性，待抗炎、化學治療或放療後，氣道稍通暢，繼續不斷多次留痰，有可能得到細胞學陽性診斷。
4.痰檢肺癌相關基因的分子生物學。目前痰脫落細胞分子生物學檢查有廣闊的發展前途，北京協和醫院已進行免疫標記技術在肺癌篩查中應用研究。
（1）不均一核糖蛋白（heterogeneous nucleal ribonucleoprotein，hnRNP）A2/B1：是一種RNA結合蛋白，在肺癌組織中表達增高，痰脫落細胞陽性者表達爲57%。肺癌高危人羣監測中已證實，痰脫落細胞呈鱗狀化生和不典型增生時有hnRNPA2/B1表達。國外報道肺癌病人在臨牀確診前2年收集的痰標本中已有hnRNPA2/B1陽性表現。
（2）痰P53基因突變測定：應用聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）單鏈多肽性（single-strand comformation polymorphism，SSCP）銀染肺癌痰檢出率55.5%，診斷靈敏度55.56%，特異性98.25%。並有1例患者於臨牀診斷肺癌前1年，痰脫落細胞P53點突變已呈陽性；變性高壓液相色譜法（denaturing high performanle liquid chromatography，DHPLC）可檢測痰細胞Rb2/P130及P53突變，兩者結合特異性100%，靈敏度51.43%。