森林腦炎疫苗

1 拼音

sēn lín nǎo yán yì miáo

2 註解

3 藥典標準

3.1 藥品名稱

森林腦炎疫苗

3.2 拼音名

Senlinnaoyan Yimiao

3.3 英文名

TICK-BORNE ENCEPHALITIS VACCINE

3.4 來源(分子式)與標準

本品系用森林腦炎病毒“森張”株，接種於地鼠腎單層細胞上，培養後收集病毒 液，經甲醛溶液殺滅病毒後製成。

3.5 性狀

本品爲紅色澄明液體。不應有任何異物。

3.6 檢查

照《中國生物製品規程》中森林腦炎疫苗製造及檢定規程的各項規定，進行試驗，均應符合規定。

3.7 類別

生物製品。

3.8 劑量

皮下注射 用量照介紹的規定。

3.9 貯藏

在2 ～8 ℃的暗處保存。

4 森林腦炎疫苗製造及檢定規程

^[1]森林腦炎疫苗系用森林腦炎病毒“森林”株接種於地鼠腎單層細胞，培育後收穫病毒液，加入甲醛溶液將病毒滅活後製成。用於預防森林腦炎。

4.1 毒種

1.1　毒種來源

衛生部長春生物製品研究所保存之凍幹毒種“森林”株。每3～5年會同中國藥品生物製品檢定所應用新分離的流行株病毒攻擊，檢測“森林”株的保護力，以瞭解該毒株的有效性。

1.2　毒種檢定

1.2.1　無菌試驗

毒種啓封及每次傳代後，均需做無菌試驗，合格者方可使用。

1.2.2　病毒滴定

每正代必須用小白鼠進行腦內滴定。滴度≥9.0LogLD50/1.0ml方可用於生產。

1.2.3　純毒試驗

生產前須用小白鼠腦內法做中和試驗鑑定毒種的特異性，中和指數必須在500以上。生產中如對毒種有懷疑，應及時進行鑑定。

1.3　毒種傳代

分正亞代傳遞。傳遞代數正代不得超過15代，傳代時選用體重10～12g健康小白鼠或乳鼠。每次毒種傳代不得少於3個鼠腦。腦內接種病毒，72小時後選擇眼結膜正常，有典型戰慄、痙攣、肢體麻痹的小白鼠，處死後無菌取腦，並進行無菌試驗。如發現污染者，應及時廢棄。

1.4　毒種保存

鼠腦毒種收剖經無菌試驗後立即保存於-60℃以下，無菌試驗通過後方可使用。亦可將鼠腦毒種研磨乳化製成10%腦懸液，分裝小瓶，凍存於-60℃以下，無菌試驗合格後備用。

凍幹毒種保存在2～8℃。

森林腦炎病毒“森林”株屬二類毒種，必須設專人按有關規定負責管理，使用前、後記錄清楚。

4.2 疫苗製造

2.1　細胞製備

2.1.1　地鼠

選用2周齡左右的健康地鼠。如發現腎臟異常或有乳糜狀腹水，應廢棄。

2.1.2　細胞消化及培養

處死地鼠，無菌取腎，加入適量胰蛋白酶液消化。用營養液分散細胞，製備細胞懸液，分裝培養瓶，於37℃進行培養。營養液中牛血清含量不得超過8%。

2.1.3　外源因子檢查

每生產批細胞留5%（或不少於500ml）懸液作爲對照細胞檢查外源病毒。該細胞除不接種病毒外，細胞嘗試和處理均與生產過程平行進行。至原液收穫之日，用顯微鏡觀察，應無病變發生。並用0.2%～0.5%豚鼠紅細胞（4℃保存不超過7天）進行血吸附試驗，置4～8℃30分鐘判定結果；再置20～25℃30分鐘再次判定結果，均應爲陰性。如有可凝病變或血吸附可疑陽性，在同種細胞上繼續盲傳，如傳出病毒，該批細胞製備的疫苗應予廢棄。

2.2　病毒接種和培育

2.2.1　生產毒種配製

將鼠腦毒種解凍乳化，製成10%～20%腦懸液，離心，取上清液作爲毒種。亦可用冰凍鼠腦毒種懸液感染細胞。

2.2.2　病毒接種和培育

選擇生長良好的細胞瓶，充分噴洗細胞後，加入適量含有病毒的營養液（病毒量不得大於7.0LogLD50/1.0ml），在適當溫度下培育適當時間，棄去病毒培養液，換以新維持液，繼續培育一定時間。

2.2.3　疫苗生產過程中不得加青黴素或其他β內酰胺類抗生素。

2.3　原液

2.3.1　病毒滅活

選擇有典型細胞病變的培養瓶，經肉眼檢查無菌者進行澄清過濾，按瓶取無菌試驗及病毒滴定樣品，取樣後立即加甲醛溶液和硫柳汞，使甲醛的最終濃度爲0.05%，硫柳汞爲0.005%，置適當溫度下滅活。

無菌試驗爲接種瓊脂斜面培養基，3天判定，長菌者廢棄。

2.3.2　過濾合併及取樣

單瓶無菌試驗未長菌、滅活到期、病毒滴定合格的疫苗進行過濾合併，搖勻後做無菌試驗，取安全試驗和效力試驗樣品。

安全試驗每批合併檢定疫苗量不得超過15萬ml，效力試驗每批合併檢定疫苗量不得超過100萬ml。檢定批號和成品批號應一致。

2.3.3　原液檢定

2.3.3.1　無菌試驗

按《生物製品無菌試驗規程》進行。

2.3.3.2　病毒滴定

將滴定樣品做10倍系列稀釋，取至少3個稀釋度，每個稀釋度病毒液腦內接種體重7～9g小白鼠4只，每隻0.03ml，逐日觀察，14天判定結果（3天內非特異性死亡者不計，）滴度≥7.0LogLD₅₀/1.0ml判爲合格。不合格者可重試一次。

每個滴定批代表疫苗量不得超過15萬ml。

2.4　半成品檢定

2.4.1　滅活試驗

（1）動物法：將樣品腦內接種體重12～14g小白鼠8只，每隻0.03ml，同時腹腔接種0.5ml，爲第一代；7天后將第一代小白鼠處死3只，取腦做成10%懸液，腦內接種6只小白鼠，爲第二代；7天后將第二代小白鼠處死3只，同法接種6只小白鼠，爲第三代。每代小白鼠從接種之日起逐日觀察14天，在觀察過程中全部健存爲合格，接種後3日內非特異性死亡者不計。

若傳代3日後有個別小白鼠死亡，應立即取死鼠腦乳化成懸液再接種3只小白鼠，觀察14天，該3只小白鼠健存仍判爲合格。如仍有小白鼠死亡，該批疫苗應重試，重試合格後仍可使用。若傳出活病毒應重試，查明原因。必要時繼續滅活並進行滅活試驗，若仍傳出活病毒，該批半成品應予廢棄。

（2）細胞培養-動物法：將樣品50ml裝入透析袋內，放入6000～8000ml維持液中於4℃透析24小時，接種地鼠腎細胞或BHK21細胞，每ml樣品接種不少於3cm²的細胞片，置培養病毒的溫度下培育14天，全部健存判爲合格。若有死亡者應查明原因或重試，重試合格者仍可使用，不合格者應廢棄。

以上兩種滅活試驗方法可任選一種。

2.4.2　殘餘牛血清蛋白含量測定

用檢定所認可的試劑和方法測定，殘餘牛血清蛋白含量應≤50ng/ml。

2.4.3　效力試驗

每批疫苗腹腔免疫體重10～12g小白鼠35只，於第1、3、5日共免疫3次，每次每隻小白鼠0.3ml。另取同批小白鼠35只作爲空白對照。於第10日以“森林”毒種0.3ml進行腹腔攻擊，每天觀察1次，觀察21天判定結果。對照組LogLD₅₀/0.3ml在7.5以上，免疫保護指數達100000以上爲合格。不合格者可重試1次。

4.3 成品檢定

3.1物理檢查

疫苗應爲橘紅色透明液體，無異物。

3.2　化學檢查

按《生物製品化學檢定規程》進行。pH值爲7.2～8.0。遊離甲醛不高於0.05%，硫柳汞不高於0.01%。

3.3　無菌試驗

按《生物製品無菌試驗規程》進行。

3.4　安全試驗

每批疫苗腹腔注射體重18～20g小白鼠4只，每隻0.5ml，逐日觀察，3日內全部健存判爲合格。如有小白鼠死亡，除檢查原因外，應立即進行重試。

3.5亞硫酸氫鈉檢定

分裝後亞硫酸氫鈉要進行含量測定和無毒性試驗。含量不得低於原配濃度的60%。無毒性試驗系將樣品稀釋成1∶100，腹腔注射體重18～20g小白鼠2只，每隻0.5ml，觀察5日，應全部健存。

4.4 保存與效期

保存於2～8℃暗處。自效力檢定合格之日起效期爲2年。

5 森林腦炎疫苗使用說明書

森林腦炎疫苗系用森林腦炎病毒“森張”株接種於地鼠腎單層細胞，培育後收穫病毒液，加入甲醛溶液將病毒滅活後製成。爲橘紅色透明液體，含硫柳汞防腐劑。用於預防森林腦炎。

5.1 接種對象

有森林腦炎發生地區的居民及進入該地區的人員。

5.2 用法

本疫苗接種後，人體要經過1.5—2個月後免疫力才達到最高，因此，應在每年３月份以前完成接種工作。

1.於上臂外側三角肌附着處皮膚消毒後皮下注射。

2.劑量：

注：第1針與第2針間隔7～10日。爲減輕注射疼痛，注射前每5ml疫苗加入亞硫酸氫鈉液0.2ml，疫苗由紅色變爲黃色即可注射。

5.3 禁忌

發熱，急性疾病及嚴重慢性疾病，神經系統疾病，過敏性疾病及既往對抗生素、生物製品有過敏史者，婦女哺乳期、妊娠期均不可注射。

5.4 反應

注射後一般無反應，個別有發熱、頭暈。有皮疹者應注意觀察，必要時給予適當治療。

5.5 注意事項

1.安瓿有裂紋，疫苗混濁、變色、曾經凍結、有異物及搖不散的絮狀物者均不可使用。

2.應備有1∶1000腎上腺素，以備偶爾發生休克時急救用。接受注射者在注射後應在現場休息片刻。

3.發熱、急性傳染病及嚴重慢性病患者，神經系統疾病，過敏性疾病及有過敏史的患者和孕婦均禁用。

4.注射後２４小時少數人會有反應，多迅速恢復正常，暈厥者可注葡萄糖液或喝糖水，必要時注射腎上腺素（１:１０００）０．５～１ｍｌ（兒童酌減）。

5.6 保存

應保存於2～8℃暗處。

6 參考資料

1. ^ [1] ．"《中國生物製品規程》"．