4 腦脊液肌酸激酶的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 化驗取材
4.4 腦脊液肌酸激酶的測定原理
磷酸肌酸和二磷酸腺苷(ADP)在CK作用下生成ATP和肌酸,後者與雙乙酰和α萘酚結合生成紅色化合物,其顏色的深淺與酶活性成正比。
4.5 試劑
(1)Tris-HCl緩衝液(pH 7.4):稱取Tris 2.42g,加蒸餾水100ml,0.2mol/L HCl 88.8ml,無水硫酸鎂0.34g,調pH至7.4,室溫可保存數月。
(2)12mmol/L磷酸肌酸溶液:稱取磷酸肌酸鈉鹽43.6mg,加蒸餾水10ml,溶解後於-25℃或冰箱內冰盒中保存。
(3)4mmol/L ADP溶液:稱取ADP鈉鹽23.3mg,加蒸餾水10ml溶解,保存-25℃或冰盒中。
(4)混合底物溶液:臨用前將試劑1、2及3等量混合,在9ml混合液中加鹽酸半胱氨酸31.5mg,調pH 7.4,置冰盒中可保存1周。若空白管吸光度太高,表明遊離肌酸產生,應棄去重配。
(5)50g/L硫酸鋅溶液:準確稱取ZnSO4·7H2O 5g,加蒸餾水少許溶解,並稀釋至100ml。
(6)60g/L氫氧化鋇溶液:稱取Ba(OH)2·8H2O 6g,溶於100ml熱蒸餾水中,煮沸數分鐘,冷卻後加蒸餾水至100ml過濾。
取5ml 50g/L ZnSO4溶液,加少許蒸餾水和酚酞指示劑2滴,用Ba(OH)2溶液滴至出現粉紅色爲止。根據滴定結果,用蒸餾水稀釋Ba(OH)2溶液,使其恰與等體積的ZnSO4溶液中和。
(7)貯存鹼溶液稱:取NaOH 30g,無水碳酸鈉64g,加入蒸餾水溶解,並稀釋至500ml,置塑料瓶保存。
(8)α-萘酚溶液:稱取α-萘酚400mg,加貯存鹼溶液10ml。需新鮮配製,否則空白管吸光度偏高。
9.雙乙酰溶液 先配成10g/L水溶液,冰箱可保存數月。臨用前用蒸餾水作20倍稀釋。
10.1.7mmol/L肌酸標準液 精確稱取無水肌酸22.3mg,加蒸餾水至100ml,冰箱可保存數月。
4.6 操作方法
使用肌酸顯色操作法。
4.7 正常值
0~1U/L。
4.8 化驗結果臨牀意義
增高見於,感染性多發性神經炎、腦供血不足、腦梗死、腦血栓形成、蛛網膜下腔出血、多發性硬化症、進行性腦積水、星形細胞瘤、繼發性癲癇以及Duchenne肌營養不良症和嚴重顱腦損傷、慢性硬膜下血腫。
腦脊液CK對腦膜炎性質的鑑別診斷有一定意義,化膿性腦膜炎增高最明顯,其次是結核性腦膜炎,病毒性腦膜炎僅輕度升高。
4.9 附註
(1)肌酐、精氨酸、胍乙酸等也可與α-萘酚及雙乙酰產生顏色反應。故腎功能衰竭患者應用自身血清做空白對照,以消除肌酐的影響。
(2)α-萘酚爲白色或略帶黃色之結晶,顏色過深,應在乙醇中重結晶後再用。
(3)Mg2+爲激活劑,半胱氨酸提供巰基,氫氧化鋇和硫酸鋅沉澱蛋白並中和反應。
(4)血清CK活性>200U/L時,應用已知CK活性正常的血清稀釋後重測,其結果乘以稀釋倍數。