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第九節 其它鏈擴增技術及應用範圍
...是:製備引物A、B,引物A與待檢RNA3’端互補,並有一T7RNA多聚酶的識別結合位點。逆轉錄酶以A爲起點合成cDNA;引物B與此cDNA3’端互補,逆轉錄酶同時還具有RnaseH和DNA多聚酶的活性,又可利用引物B合成cDNA的第二鏈。RNA多聚酶以...
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研究揭示DNA如何解壓縮並轉錄
...休克基因並激活了涉及一些關鍵酶在內的進程,最終引起多聚ADP核糖聚合酶(PARP)在局部合成多聚ADP核糖(PAR,一種類似於DNA和RNA的多聚物).當DNA被壓縮時,DNA鏈緊密圍繞在組蛋白上,形成核小體.但是,事實表明,PAR和DNA競爭性結合組蛋白,...
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拉米夫定聯合苦蔘素對HBV的YMDD變異的影響
【摘要】目的探討拉米夫定聯合苦蔘素對HBV-DNA多聚酶的YMDD變異率的影響。方法觀察組50例慢性乙型肝炎患者給予拉米夫定聯合苦蔘素治療,對照組48例應用拉米夫定治療。結果觀察組治療1年時發生YMDD變異2例(4%),對照組8例(16...
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第四節 影響PCR的主要因素
...G+C)%含量引物的組成應均勻,儘量避免含有相同的鹼基多聚體。兩個引物中(G+C)%含量應儘量相似,在已知擴增片段(G+C)%含量時宜接近於待擴增片段,一般以40%~60%爲佳。 3.引物內部應避免內部形成明顯的次級結構,...
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3-1-4轉錄過程
...破壞終止子的功能。對終止子突變的分析亦顯示DNA模板上多聚dA順序的重要性。如將此序列中的一個鹼基換掉,或除去部分序列(缺失)都可使終止子失活。←──雙重對稱───→模板5‘-CCCAGCCCGCCTAATGAGCGGGCTTTTTTTTGAACAAAA-3‘(DNA)3‘-...
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第二節 病毒的增殖
...痘苗病毒當其複雜的核心結構進入胞漿中後,隨之病毒體多聚酶活化,合成病毒脫殼所需要的酶,完成脫殼。 四、生物合成 DNA病毒的RNA病毒在複製的生化方面有區別,但複製的結果都是合成核酸分子和蛋白質衣殼,然後...
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第三節 分子生物學實驗診斷技術
... 細胞用離心塗片機塗片或組織切片置於載玻片上。4%多聚甲醛(PFA)/PBS固定(固定時間因標本而異10-20分鐘,也可用含2%甲醛,0.05%戊二醛,2.5mmol/lCaCl2的0.1mol/L磷酸緩衝液pH7.3,500W微波爐中照射10-20秒,固定)。馬上用PBS洗...
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受體介導基因轉移的策略研究與進展
... 1方法和原理 配體與目的基因的連接,一般是通過多聚賴氨酸等多聚陽離子。配體與這些多聚陽離子的連接,是通過加入化學物質,形成共價的化學結合,然後與含目的基因的質粒以適當的比例在室溫下混合。帶負電荷的...
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科學家設計出首個長鏈RNA人工合成酶
...程中扮演過主要的遺傳和催化作用的角色。一種本身爲RNA多聚酶的核酶(它可以複製並轉錄原始的RNA基因組)是這一假說的關鍵。以往的研究產生了R18RNA多聚酶,它有着有限的多聚酶活性,並能合成至多14個核苷酸的RNA。在這篇...
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第二節 病毒感染的防治原則
...,該藥被病毒編碼的胸苷激酶(TK)磷酸化,藉助病毒DNA多聚酶,摻入病毒DNA中,阻斷DNA鏈的延伸。對編碼TK的單純皰疹,水痘帶狀皰疹病毒感染有治療作用,而對不編碼TK的鉅細胞病毒、EB病毒不敏感。磷酸化的無環鳥苷對宿主...
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醫學微生物學-反轉錄病毒複習題
一、選擇題:A型題:1.逆轉錄病毒含有A.一種依賴RNA的DNA多聚酶B.一種依賴RNA的RNA多聚酶C.一種依賴DNA的DNA多聚酶D.一種脫氧胸腺嘧啶激酶E.一種核苷酸磷酸水解酶2.關於逆轉錄病毒的敘述,下列哪項是錯誤的A.爲有包膜球形病毒B....
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第一節 原位雜交組織化學概述
...因組織中mRNA的降解是很快的。在固定劑中,最常用的是多聚甲醛。和其它的固定劑(如戊二醛)不同,多聚甲醛不會與蛋白質產生廣泛的交叉連接,因而不會影響探針穿透入細胞或組織。其它如醋酸-酒精的混合液和Bouin’s固定...
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拉米夫定治療慢性乙型肝炎的療效評價
...制病毒複製使病情好轉,該藥競爭性抑制乙型肝炎病毒DNA多聚酶,抑制乙型肝炎病毒DNA的合成。由於拉米夫定不能殺滅乙型肝炎病毒,停藥後病情容易反跳。在連續用藥過程中,乙型肝炎病毒對拉米夫定易耐藥。1適應證治療前...
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醫用生物化學考試模擬題(2)
...E、氫鍵4、大部分真核細胞mRNA的3—末端都具有()A、多聚AB、多聚UC、多聚TD、多聚CE、多聚G5、成人體內氨的最主要的代謝去路爲()A、合成非必需的氨基酸B、合成必需的氨基酸C、合成NH4+隨尿排出D、合成尿素E、合成嘌呤...
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分子生物學實驗基礎知識
...有蛋白質結合。質粒有嚴緊型和鬆弛型之分。嚴緊型由DNA多聚酶Ⅲ複製,一個細胞可複製1-5個質粒。而鬆弛型由DNA多聚酶Ⅰ複製,一個細胞可複製30-50個質粒,如果用氯黴素可阻止蛋白質合成,使質粒有效利用原料,複製更多的...
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第二節 分子生物學實驗基礎
...有蛋白質結合。質粒有嚴緊型和鬆弛型之分。嚴緊型由DNA多聚酶Ⅲ複製,一個細胞可複製1-5個質粒。而鬆弛型由DNA多聚酶Ⅰ複製,一個細胞可複製30-50個質粒,如果用氯黴素可阻止蛋白質合成,使質粒有效利用原料,複製更多的...
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第五節 原位雜交免疫細胞化學技術的未來與展望
...CatNo10~12,12~14mm的孔)的凹孔內,加熱105℃90s,然後以2%多聚甲醛-磷酸緩衝液,pH7.4,固定1h,PBS漂洗3min×3。如用生物素標記核酸探針,應用0.3%的H2O2孵育37℃過夜,然後以蛋白酶K溶液(5μg/mlPBS)55℃孵育2h(孵育時間應根據細...
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第五節 RNA的結構與功能
...NA的5′末端被加上一個m7pGppp帽子,在mRNA3′末端多了一個多聚腺苷酸(polyA)尾巴。mRNA從5′末端到3′末端的結構依次是5′帽子結構,5′末端非編碼區,決定多肽氨基酸序列的編碼區,3′末端非編碼區,和多聚腺苷酸尾巴。多聚...
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載體
...有蛋白質結合。質粒有嚴緊型和鬆弛型之分。嚴緊型由DNA多聚酶Ⅲ複製,一個細胞可複製1-5個質粒。而鬆弛型由DNA多聚酶Ⅰ複製,一個細胞可複製30-50個質粒,如果用氯黴素可阻止蛋白質合成,使質粒有效利用原料,複製更多的...
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通用引物檢測腦炎患者腦脊液皰疹病毒DNA及其酶切鑑
...皰疹病毒DNA的報道並不多見。我們選擇皰疹病毒科病毒DNA多聚酶基因高保守區一對引物,對中樞神經系統(CNS)感染病人CSF作PCR擴增和病毒分離,以研究病毒性腦炎的快速診斷方法。 材料與方法 1.標本:80例病人的80份CSF由...
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第五節 PCR各處應用模式
...然後用甲醇/醋酸(3:1,V/V)、Carnoy溶液、無水乙醇或4%多聚甲醛溶液固定5~15min。用蒸餾水沖洗,乾燥,直接使用或保存於-20℃備用。在玻片上劃20mm×28mm爲免疫組化反應區。加入30μlPCR反應混合液,其中含10mmol/LTrispH8.3,50mmol/LKC...
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第三節 目的序列與載體的連接
...股DNA加上polyC,這樣人工在DNA兩端做出能互補的共核苷酸多聚物粘性末端,退炎後能結合連接(圖20-6),這樣方法稱爲同聚物加尾法。圖20-6同聚物加尾連拉法 對平末端的DNA,也可先連上人工設計合成的脫氧寡核苷酸雙鏈接...
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貓免疫缺陷病毒或是研究抗HIV新藥的一種契機
...四聚體(中)。而完全活性形式在包括二聚體的二聚體,多聚化的分子基礎尚未充分的特點。 在這裏,研究確定的一個PHe187二聚化從貓免疫缺陷病毒(FIV)的關鍵決定因素,一個靈掌類慢病毒造成的自然宿主,艾滋病和報告...
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北京大學醫學部1996年碩士入學考試生物化學試題
...正確的是A、除5,帽外,其餘mRNA序列均可被轉譯B、除3,多聚A外,其餘mRNA序列可被轉譯C、除5,帽外,3,多聚A外,其餘mRNA序列均可被轉譯D、除5,帽外,3,多聚A外,大部分mRNA序列均可被轉譯E、以上論述都不對10.10嘌呤酶至...
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第二十二章 聚合酶鏈反應(PCR)技術的發展和應用--第一節 概述
...PCR)技術的發展和應用第一節 概述 聚合酶鏈反應或多聚酶鏈反應(PolymeraseChainReaction,PCR),又稱無細胞克隆技術(“freebacteria”cloningtechnique),是一種對特定的DNA片段在體外進行快速擴增的新方法。該方法一改傳統分子克隆...
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人工構建自組裝多酶體研究創新成果
...和合成生物學領域的一個重要研究方向。爲解決如何實現多聚體酶精確組裝的問題,該研究團隊選擇了兩個異種微生物來源的多聚體酶(亮氨酸脫氫酶和甲酸脫氫酶)作爲技術模型,利用蛋白質自身同源自聚的特性以及相互作用...
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鄧興旺實驗室最近發表一系列文章
...P1形成穩定的複合體。它們與COP1形成的複合體是一組異源多聚體,每個多聚體至少包括兩個SPA蛋白,並且不同的多聚體其SPA蛋白組成也不同。每個SPA-COP1多聚體的相對量是由組成該多聚體的SPA蛋白在某種特定條件下的表達水平決...
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高護專業《生物化學》期未自測題
...m,KmE.Vm不變,Km4.大部分真核細胞mRNA的3`—末端都具有()A.多聚AB.多聚UC.多聚TD.多聚CE.多聚G5.維生素D的活性形式是()A.維生素D3B.25—(OH)—D3C.24,25—(OH)2—D3D.1,24,25—(OH)3—D3E.1,25—(OH)2—D36.肌糖原分解不能直...
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清華大學生物化學試題(碩士)1998年-1996年
...決於肽鏈的氨基酸側鏈性質。試預測在室溫下溶液中下列多聚氨基酸哪種能形成α-螺旋結構。a.多聚異亮氨酸,pH=7.0b.多聚精氨酸,pH=1.5c.多聚蘇氨酸,pH=7.0d.多聚穀氨酸,pH=1.5()⑷下列幾種酶中,哪一個酶需要金屬離子作爲輔...
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6-2-3RNA腫瘤病毒的生物化學特性
...切酶和外切酶和外切酶等,特別有意義的是它含有一種DNA多聚酶,在體內、外均能轉錄病毒性RNA成爲DNA,稱爲依賴RNA多聚酶(RNA-dependentDNApolymerase),即爲逆轉錄酶(reversetranscriptase,RT),分佈在病毒的類核內。 逆轉錄酶...