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Nature:LINE-1逆轉錄轉座事件的作用
LINE-1(longinterspersedelement-1)逆轉錄轉座子在試管中和在小鼠腦中已知能夠穿過成年大鼠神經前體細胞(NPCs)的基因組。現在,研究表明,從人胎兒腦中分離出的以及從人胚胎幹細胞演變來的NPCs,在試管中還支持人工培養的人LINE-1s...
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逆轉錄轉座子在腫瘤發生中的重要作用
6月28日,Science雜誌在線報道了關於體細胞逆轉錄轉座子在人類腫瘤發生中作用的最新研究進展。轉座子(TEs)在人類基因組中含量豐富,有些能夠通過RNA中間體產生新的插入序列。在癌症細胞中,通常抑制TE活動的機制如果遭到...
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應用循環逆轉錄PCR技術檢測丙型肝炎病毒RNA
摘要:循環逆轉錄(circulatoryreversetranscription,CRT)是線性增長逆轉錄cDNA產量的一種新技術。爲了將該技術用於檢測HCVRNA,通過改變CRT的循環次數,結合競爭PCR,作出標準曲線。採用16次CRT加34次循環PCR檢測了136例HCVELISA陽性、54...
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人類基因組中發現非逆轉錄RNA病毒
...色體,將會隨生殖細胞傳遞到子代個體中。到目前爲止,逆轉錄病毒是唯一已知可在脊椎動物中內生化的病毒。但據最新的這項研究發現,非逆轉錄病毒博爾納病毒也可在進化過程中內生化到哺乳動物基因組中。博爾納病毒(BDV)...
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新基因的發現或有助於治療阿爾茨海默氏症
...產生和T蛋白磷酸化。 研究小組還發現,Rps23r1是通過逆轉錄轉座過程被創造出來的。基因通過信使核糖核酸(mRNA)逆轉錄進行復制,而所得基因副本會被放置在細胞DNA的不同位置。雖然大多數逆轉錄轉座事件都導致非功能性...
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應用逆轉錄-聚合酶鏈反應檢測乙型肝炎患者血清中的HDVRNA
...、肝炎慢性化。甚至發展爲肝硬變的因素之一。我們採用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)對各型乙型肝炎患者進行了血清HDVRNA的檢測。108份血清採自石家莊市第五醫院1994年10月~1995年12月住院患者,均有一項以上HBV血清標誌物陽性。...
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科學家能讓幹細胞衰老變緩慢
...,成熟幹細胞出現的大多數DNA損傷和染色質改變原因在於逆轉錄轉座子。”喬治亞理工學院生物學校副教授金#8226;佐頓說。“逆轉錄轉座子過去被認爲沒有什麼功能,甚至被標上‘垃圾DNA’的標籤。但累積證據表明,這些成分在...
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BPDE誘發16HBE惡性轉化過程中eIF3p36的表達變化
...gT-TAMARA-3’,擴增產物cDNA長度爲65bp。 1.2.2eIF3p36mRNA逆轉錄合成cDNA採用中山達安基因公司自制逆轉錄試劑盒,在PE9600PCR儀按下列條件進行逆轉錄,反應條件爲37℃1h,95℃3min,逆轉錄合成cDNA。反應總體積爲20μl。 1.3Taqman熒...
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iPSC基因組穩定性良好
...幹細胞的基因組測序,發現重編程過程不會增加DNA重排或逆轉錄因子轉座的風險。該研究成果發表於10月4日的《細胞—幹細胞》(CellStemCell)雜誌上。誘導多功能幹細胞(iPSC)繞開了胚胎幹細胞研究面臨的倫理和法律等障礙,...
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PCR和RT-PCR技術
...更易於操作。RT-PCR的模板可以爲總RNA或poly(A)+選擇性RNA。逆轉錄反應可以使用逆轉錄酶,以隨機引物、oligo(dT)或基因特異性的引物(GSP)起始。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在最佳條件下進行...
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表達人自身抗原SSA/Ro60重組體的構建及鑑定
...自身免疫病中的抗原抗體作用提供物質基礎。方法:採用逆轉錄-PCR技術克隆自身抗原SSA/Ro60cDNA,定向插入表達載體PGEX-2T,並經酶切電泳,DNA測序鑑定分析。結果:經鑑定,證明成功構建了表達人自身抗原SSA/Ro60的重組體。結論...
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應用GelWorks軟件定量分析PCR擴增產物
...產物的定性與定量分析。方法提取孕婦全血mRNA,經體外逆轉錄後,應用ε/γ引物引導擴增胎兒特異血紅蛋白基因片段,同時用不同劑量標準mRNA經逆轉錄及PCR擴增後,經瓊脂糖凝膠電泳,以凝膠成像系統掃描成像,用GelWorks1D軟件...
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我國掌握藍舌病病毒檢測技術
...野戰輸血研究所成功研製的兩個藍舌病病毒檢測試劑盒(逆轉錄—聚合酶鏈式反應核酸通用檢測試劑盒和熒光定量逆轉錄—聚合酶鏈式反應核酸通用檢測試劑盒),經農業部批准進入臨牀試驗。臨牀試驗完成後,將按國家有關要...
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豚鼠哮喘模型和哮喘患者氣管上皮細胞內皮素-1和內皮素轉化酶mRNA表達
【摘要】目的通過逆轉錄-DNA聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術檢測豚鼠哮喘模型氣管上皮內皮素-1(ET-1)mRˉNA表達,檢測哮喘患者氣管上皮內皮素-1(ET-1)和內皮素轉換酶(ECE)mRNA表達。方法(1)動物實驗部分:Hartley株豚鼠用卵蛋白...
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胰腺癌p16基因mRNA異常表達的研究
我們應用逆轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測胰腺癌中p16基因mRNA的表達情況,同時應用聚合酶鏈式反應-單鏈構象多態性分析(PCR-SSCP)對其異常表達的原因進行分析,現將結果報道如下。 一、材料和方法 1.對象:新鮮胰腺癌...
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法專家首次揭示艾滋病毒侵入細胞核全過程
...連成一體後,艾滋病病毒便可以繁殖。艾滋病病毒是一種逆轉錄病毒。在感染受害細胞時,這類病毒首先將其RNA(核糖核酸)逆轉錄爲DNA(脫氧核糖核酸),然後將這段逆轉錄的基因插入細胞基因中,由細胞的轉錄機構轉換爲病...
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喉癌組織中表皮生長因子受體mRNA含量測定
...外科雜誌2006Vol.41No.10P.777-78122(杭州)爲了建立TagMan探針逆轉錄-實時熒光定量PCR技術測定喉癌組織中表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)mRNA水平的方法,分析其應用價值。研究者設計高特異性引物和探針,以TagMan探針...
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腎癌乙酰肝素酶基因和蛋白表達的研究
...及其與腎癌發生、發展和轉移的關係。方法應用熒光定量逆轉錄聚合酶鏈式反應和免疫組化Envision二步法分別檢測30例新鮮腎癌和癌旁正常組織中乙酰肝素酶mRNA的表達水平及62例石蠟包埋腎癌組織中乙酰肝素酶蛋白的表達水平。...
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梭菌基因刪除新策略
...II型內含子可高效插入梭菌基因組的啓發,設計了一個將逆轉錄轉座與同源重組結合起來的基因刪除策略。這一策略的第一步是在II型內含子的下游引入與擬刪除基因上游同源的一段序列(簡稱爲同源序列);第二步是通過逆轉...
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HIV/HCV共患病患是否可以採用抗病毒療法?
...患HIV且同時感染丙型肝炎病毒(HCV)的患者在使用抗病毒逆轉錄療法時不僅抑制HIV,還減少了HCV的複製。美國辛辛那提大學研究人員7月23日刊載在ScienceTranslationalMedicine期刊上的研究報道表示,罹患HIV且同時感染丙型肝炎病毒(HC...
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Nature子刊:於曉方課題組揭示蛋白活化機制
...抗例如HIV和SIV等反轉錄病毒。其具有的dNTPase活性與這一逆轉錄病毒限制功能有關。SAMHD1可通過耗盡dNTP水平抑制不分裂骨髓細胞和靜息CD4+細胞中的反轉錄病毒。這標誌着病毒學特別是HIV領域又一輪研究熱潮的開始。今年9月,於...
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動物所在基因起源和丟失研究中取得新進展
...起源之後其外顯子/內含子結構往往發生快速的演化。RNA逆轉錄可產生新的複製基因,而這些新基因不含有內含子,因此是研究內含子起源機制的良好體系。中國科學院動物研究所張勇課題組總結比較了若干母基因和子基因的結...
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小鼠白細胞介素-18的cDNA克隆及在真核細胞中初步表達的研究
...一醫院感染疾病科,北京100034)關鍵詞:白細胞介素-18;逆轉錄多聚酶鏈反應;cDNA;基因克隆化;基因表達 摘 要 目的: 克隆小鼠白細胞介素-18(IL-18)編碼區的cDNA,並實現在真核細胞中的表達。方法:用小鼠白細胞介素...
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法科學家首次拍攝艾滋病病毒侵入細胞核全過程
...一體後,艾滋病病毒便可以繁殖。 艾滋病病毒是一種逆轉錄病毒。在感染受害細胞時,這類病毒首先將其RNA(核糖核酸)逆轉錄爲DNA(脫氧核糖核酸),然後將這段逆轉錄的基因插入細胞基因中,由細胞的轉錄機構...
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iPS中多能標記物的表達順序
...能通過轉錄因子(transcriptionfactor)Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc的逆轉錄轉導(retroviraltransduction)來實現多能性的誘導。在2008年2月7日出版的《細胞—幹細胞》(CellStemCell)上,來自美國的一組科學家發明了一種新技術,使得以上四種...
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乙型腦炎病毒TaqMan逆轉錄聚合酶鏈反應檢測方法的建立
【摘要】目的採用TaqMan技術,研究建立實時熒光逆轉錄聚合酶鏈反應技術(RT-PCR)檢測乙型腦炎病毒(Japaneseencephalitis,JEV)的效果。方法根據JEV非結構蛋白基因NS3基因序列(GenBank序列號,U15763),結合生物學軟件序列比對分析,...
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HCN4基因在風心二狹心房纖顫患者心房組織中mRNA表達初探*
...礎。方法取手術患者心耳組織100mg,提取RNA後應用半定量逆轉錄-PCR方法檢測mRNA含量,並對PCR產物測序分析。以HCN4基因mRNA和內參β-actin含量的比值作爲評價HCN4基因mRNA表達水平指標。結果測定HCN4基因cDNA序列同源性爲100%。試驗組...
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胸腺素beta4在快速老化鼠耳蝸的過度表達
...熒光顯色,並使用微機對其圖像進行分析。通過實時定量逆轉錄聚合酶鏈式反應技術對其結果進行驗證。用免疫熒光染色的方法,確定候選基因所編碼的蛋白在耳蝸中的表達部位。結果多數基因在老年耳蝸中的表達並沒有明顯的...
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應用干擾RNA體外抑制嚴重急性呼吸綜合徵冠狀病毒N基因的表達
...GFP表達的強弱,採用WesternBlot分別檢測GFP與N蛋白的表達,逆轉錄PCR檢測N基因的mRNA。結果pshRNA-N作用組綠色熒光強度明顯弱於未乾擾組,WesternBlot和逆轉錄PCR結果也證實pshRNA-N對N基因和N蛋白的表達有明顯抑制作用,而無關序列的sh...
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德國制定修復性基因治療新標準
...止基因治療的試驗,因爲專家認爲這個孩子的白血病是由逆轉錄基因傳病媒介激發的。當一項動物實驗也出現類似的結果時,德國當局決定暫時終止一系列的試驗。德國醫生協會和審批基因治療的PaulEhrlich研究所...