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第二節 核酸分子雜交法
...鏈,此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。待測核酸序列爲性病病原體基因組或質粒DNA。探針以放射核素或非放射性核素標記,以利於雜交信號的檢測。 所謂雜交(hydridization)指兩個以上的分子因具有...
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分子雜交技術
...稱爲雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。 雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總RNA。根據使用的方法被...
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DNA—金納米粒子複合探針製備新方法問世
DNA—金納米粒子的複合探針是一種常用的納米生物材料,在生物檢測、治療乃至納米光子學中具有廣泛的應用。最近,中國科學院上海應用物理研究所物理生物學實驗室的研究人員發展出一種製備高性能DNA—金納米粒子複合探針...
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第四節 非放射性標記的核酸探針
第四節 非放射性標記的核酸探針 放射性標記核酸探針在使用中的限制,促使非放射性標記核酸探針的研製迅速發展,在許多方面已代替放射性標記,推動分子雜交技術的廣泛應用。目前已形成兩大類非放射標記核酸技術,...
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第十三章 基因診斷--第一節 基因診斷的原理
...和RNA之間進行。因此,當用一段已知基因的核酸序列作出探針,與變性後的單鏈基因組DNA接觸時,如果兩者的鹼基完全配對,它們即互補地結合成雙鏈,從而表明被測基因組DNA中含有已知的基因序列。由此可見,進行基因檢測有...
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EMB基因330密碼子分子DNA探針設計及熒光檢測
...的針對結核桿菌耐乙胺丁醇embB330密碼子位點設計分子DNA探針,嘗試運用熒光分光光度計直接觀測液相中分子DNA探針與embB330密碼子擴增產物雜交後的熒光信號,從而檢出該位點突變。方法運用軟件Beacondesigner設計embB基因包含330密...
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第一節 原位雜交組織化學概述
...DNA的構建成功,核酸自動合成儀的誕生,大大豐富了核酸探針的來源,新的核酸分子雜交類型和方法不斷涌現。按其作用方式可大致分爲固相雜交和液相雜交兩種:液相雜交是指參加反應的兩條核酸鏈都遊離在溶液中,而固相雜...
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完全自組裝DNA納米結構基因檢測平臺
...查數千個基因的突變或者發現疾病的線索。然而,由於DNA探針是固定在微陣列芯片的固體表面上的,靶標尋找到探針是一個緩慢的過程。而且,很難把探針之間的距離控制在納米精度上。“在這項研究中,我們開發了一種水溶性...
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第三節 放射性同位素標記核酸探針
第三節 放射性同位素標記核酸探針 最常用的同位素是α-32PdNTP,3HdNTP,及35SdNTP,多用缺品平移法、末端標記法,隨機引物延伸法和反轉錄標記法。在以mRNA製備cDNA時,同時摻入標記的脫氧核苷酸,製出cD-NA標記探針。 一...
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第三節 DNA及寡核苷酸探針在原位雜交組織化學中的應用
第三節 DNA及寡核苷酸探針在原位雜交組織化學中的應用 一、DNA探針的應用 雖然一般認爲DNA探針敏感度不如cRNA探針,但在病毒的檢測等領域中DNA探針仍得到廣泛的應用。 在原位雜交細胞化學的操作步驟方面與cRNA探...
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第五節 寡核苷酸探針的製備
第五節 寡核苷酸探針的製備 利用寡核苷酸自動合成儀,可很簡單地合成製備寡核苷酸探針(如15~50bp),這類探針具有以下優點:①短的探針比長探針雜交速度快,特異性強。②可以在短時間內大量製備。③在合成中進行...
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分析單細胞內基因表達的新途徑
...中發生突變的情況,或者發現疾病的線索。然而,因爲DNA探針固定在微陣列芯片的固體表面上,所以靶標尋找到探針是一個緩慢的過程。此外,很難把探針之間的距離控制在納米精度上。美國亞利桑那州立大學生物設計研究所的...
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RNA探針復活古DNA
...興趣的試驗樣本相匹配。之後,他們將長段DNA樣本作爲“探針”對試驗樣本進行過濾(現代人類與古人類的DNA非常相似,其相似程度足以使得DNA樣本相互吻合)。但是,這種方法依然非常昂貴,並且這種以DNA爲“探針”的方法只...
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第四節 遺傳病與腫瘤的基因診斷
... 一、分離基因進行結構分析 利用DNA離體轉化,製備探針,製備基因文庫進行篩檢,最後鑑定載體中插入DNA片段的特性等一系列技術,可以設法分離出目的基因或某一特定的DNA順序。然後通過DNA核苷酸順序分析可以弄清楚某...
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上海應用物理研究所自主發明用納米探針蘸取“內切酶”
...尺度的DNA實施手術,須在原子力顯微鏡下,用特殊的納米探針做“手術刀”。上世紀90年代至2004年,上海應用物理研究所教授李民乾、胡鈞帶領實驗室,在納米水平上對單個DNA分子實施“外科手術”,初步實現對單分子的切割、...
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Southern雜交
...可用來檢測經限制性內切酶切割後的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟: (1)酶切DNA,凝膠電泳分離各酶切片段,然後使DNA原位變性。 (2)將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。 (3)預...
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利用分子探針檢測DNA損傷的新方法
...進展[3]。據報道,他們開發了一種基於人工合成核苷分子探針檢測DNA損傷的新穎方法,該工作有望開闢一系列新型分子探針用於DNA化學修飾研究及損傷檢測的新途徑。致癌物質與DNA所形成加合物的結構,及該加合物在DNA鏈上的分...
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組織原位雜交
...交,而原位雜交是經適當處理後,使細胞通透性增加,讓探針進入細胞內與DNA或RNA雜交,因此原位雜交可以確定探針互補序列在胞內的空間位置,這一點具有重要的生物學和病理學意義。例如,對緻密染色體DNA的原位雜交可用於...
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雙鏈DNA探針隨機引物合成法
隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴於反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,產物平均長度爲400-600個核苷酸。利用隨機引物進行反應的優...
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組織原位雜交(Tissueinsituhybridization)
...交。而原位雜交是經適當處理後,使細胞通透性增加,讓探針進入細胞內與DNA或RNA雜交。因此原位雜交可以確定探針的互補序列在胞內的空間位置,這一點具有重要的生物學和病理學意義。例如,對緻密染色體DNA的原位雜交可用...
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樊春海談DNA納米基因芯片:體現了現代科技的交叉性
...基因檢測的效率?樊春海:在這塊基因芯片上佈滿了基因探針,基因探針就是一小段單鏈DNA,可以用來檢測疾病,以及發現與遺傳病、傳染病相關的一些情況。基因芯片借用了計算機芯片的概念,就是將衆多基因探針集成到一塊...
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採用有效TaqMan探針和抽提病毒DNA進行實時PCR快速定量乙型肝炎病毒DNA
...5):7365-70.19爲快速定量乙型肝炎病毒(HBV)DNA,採用有效TaqMan探針和抽提病毒DNA進行實時PCR,研究人員將分別靶向pGEM-T載體的HBV染色體S,C和X區域克隆PCR產物製備三個標準體,比較源於三種不同標準曲線血清樣本HBV的拷貝數和Ct值以選...
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第三節 分子生物學實驗診斷技術
...發展而緩和,但其它缺點尚需努力克服。 雜交實驗的探針應具有特異性,對應不同的雜交方法靶基因(被檢基因)應有一定的純度與丰度。雜交反應的開始是碰撞,探針濃度高則速率增加,一般32P標記探記探針5-100ng/ml,非...
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待檢測樣品製備
...物處理。從血液或活組織中獲取的DNA/mRNA樣品在標記成爲探針以前必須擴增以提高閱讀靈敏度,但這一過程操作起來卻有一定的難度。比如在一個癌細胞中有成千上萬個正常基因的干擾,雜合癌基因的檢測和對它的高效、特異地...
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美國藥典對現有殘餘DNA檢測技術的評價
...ybridization-based):在這種方法中,根據宿主DNA序列設計DNA探針用於測定產品中配對DNA的數量。雙鏈DNA被變性成單鏈後固定在尼龍膜或硝化纖維膜上,DNA探針被放射或熒光隨機摻入標記以後,與膜上固定的樣品宿主DNA雜交結合,並...
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微生物分子生物學技術及其在環境污染研究中的應用
摘要:本文較爲系統地概述了核酸探針檢測技術、利用引物的PCR技術、DNA序列分析技術和電泳分離及顯示技術的研究進展,並探討了這些技術在環境污染研究中的應用及其方向,表明,這些被認爲是重要的微生物分子技術,在探...
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第二節 核酸(基因)探針目的核酸的製備技術
第二節 核酸(基因)探針目的核酸的製備技術 一、特異性目的核酸(或基因)的製備 核酸分子探針的製備首先需要獲得所要的特異性核酸或其片段。可用以下方法制備: (1)直接分離基因核酸:即從基因組上直...
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第二節 常用基因診斷技術
...定基因片段已原位轉移到膜上後,即可與同位素標記了的探針進行雜交,並將雜交的信號顯示出來。雜交通常在塑料袋中進行,袋內放置上述雜交濾膜,加入含有變性後探針的雜交溶液後,在一定溫度下讓單鏈探針DNA與固定於膜...
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待檢測樣品製備
...物處理。從血液或活組織中獲取的DNA/mRNA樣品在標記成爲探針以前必須擴增以提高閱讀靈敏度,但這一過程操作起來卻有一定的難度。比如在一個癌細胞中有成千上萬個正常基因的干擾,雜合癌基因的檢測和對它的高效、特異地...
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待檢測樣品製備
...物處理。從血液或活組織中獲取的DNA/mRNA樣品在標記成爲探針以前必須擴增以提高閱讀靈敏度,但這一過程操作起來卻有一定的難度。比如在一個癌細胞中有成千上萬個正常基因的干擾,雜合癌基因的檢測和對它的高效、特異地...