DNA探針

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心氣虛,則脈細;肺氣虛,則皮寒;肝氣虛,則氣少;腎氣虛,則泄利前後;脾氣虛,則飲食不入。
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1 拼音

DNA tàn zhēn

2 註解

DNA探針是最常用的核酸探針,指長度在幾百鹼基對以上的雙鏈DNA或單鏈DNA探針。現已獲得DNA探針數量很多,有細菌病毒原蟲真菌、動物和人類細胞DNA探針。這類探針多爲某一基因的全部或部分序列,或某一非編碼序列。這些DNA片段須是特異的,如細菌毒力因子基因探針和人類Alu探針。這些DNA探針的獲得有賴於分子克隆技術的發展和應用。以細菌爲例,目前分子雜交技術用於細菌分類菌種鑑定比之G C百分比值要準確的多,是細菌分類學的一個發展方向。加之分子雜交技術的高敏感性,分子雜交在臨牀微生物診斷上具有廣闊的前景。細菌基因大小約5×106bp,約含3000個基因。各種細菌之間絕大部分DNA是相同的,要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要採取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段後分別克隆得到包含基因組的全信息克隆庫。然後用多種其它菌種的DNA作探針來篩選,產生雜交信號的克隆被剔除,最後剩下的不與任何其它細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段。將此重組質粒標記後作探針進一步鑑定,亦可經DNA序列分析鑑定基因來源和功能。因此要得到一種特異性DNA探針,常常是比較繁瑣的。探針DNA克隆的篩選也可採用血清方法,所不同的是所建DNA文庫爲可表達性,克隆菌落或噬斑經裂解後釋放出表達抗原然後用來源細菌的多克隆抗血清篩選陽性克隆,所得到多個陽性克隆再經其它細菌抗血清篩選,最後只與本細菌抗血清反應的表達克隆即含有此細菌特異性基因片段,它所編碼的蛋白是該菌種所特有的。用這種表達文庫篩選得到的顯然只是特定基因探針。?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /

對於基因探針克隆尚有更快捷的途徑。這也是許多重要蛋白質編碼基因克隆方法。該方法的第一步是分離純化蛋白質然後測定該蛋白的氨基羥基末端的部分氨基酸序列,然後根據這一序列合成一套寡核苷酸探針。用此探針在DNA文庫中篩選陽性克隆即是目標蛋白的編碼基因。值得一提的是真核細胞和原核細胞DNA組織有所不同。真核基因中含有非編碼內含子序列,而原核則沒有。因此,真核基因DNA探針用於檢測基因表達時雜交效率要明顯低於cDNA探針。 DNA探針(包括cDNA探針)的主要優點有下面三點:①這類探針多克隆質粒載體中,可以無限繁殖,取之不盡,製備方法簡便。②DNA探針不易降解(相對RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探針的標記方法成熟,有多種方法可供選擇,如缺口平移,隨機引物法,PCR標記法等,能用於同位素和非同位素標記。

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