3 概述
唾液中的富組蛋白主要來源於腮腺、頜下腺、舌下腺。其組成特點是分子中含較多的鹼性氨基酸(約48%),其中一半爲組氨酸,這些鹼性氨基酸與其功能密切相關。富組蛋白不同於其他唾液蛋白的一個顯著特點,是其RNA僅侷限於人的腮腺及頜下腺中,由此推測其功能僅侷限於唾液中。
4 唾液富組蛋白的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 唾液富組蛋白的測定原理
激光散射光係指一定波長的光通過溶液時遇到抗原-抗體複合物,光線被折射,發生偏轉。偏轉角度可以從0~90°,這種偏轉的角度可因光線波長和離子大小不同而有所區別。散射光的強度與抗原抗體複合物的量成正比,同時也和散射夾角成正比,和波長呈反比。測定方法有終點法和速率法兩種。。
4.5 試劑
(1)稀釋液:0.2mol/L Na2HPO463ml,0.2mol/L NaH2PO437ml,0.5mol/L NaCl 100ml,NaN21.0g,蒸餾水加至1000ml,經0.45μm微孔濾膜過濾,分裝,4℃保存備用。
(2)反應液:聚乙二醇(PEG,分子量6000)4.6g溶於稀釋液中,略微加熱助溶,補足100ml,用0.45μm微孔濾膜過濾分裝。4℃保存備用。
(3)校正標本樣:自制校正標本樣時,可根據ICS校正卡上所列各種蛋白成分的含量,應用國產標準參考標本樣,根據公式C1V1=C2V2換算成校正卡上含量。亦可將無溶血、無乳糜的正常人混合標本樣測出有關成份的含量後,略作調正,使與校正卡上含量一致,然後過濾分裝,低溫保存。
(4)質控唾液:可將數十份正常人唾液混合,加1g/L NaN3,直接用C或D稀釋度即可。
(5)抗血清:可用國內特異性好,親和力強,效價高的抗血清,選擇最適稀釋度,用0.45μm微孔濾膜過濾。以已知含量參考血清作爲標準抗原,用ICS手動或自動方式測出該成分的含量,使與校正卡上所列含量一致,然後分裝4℃保存。
4.6 操作方法
(1)自動速率散射比濁法:以Beckman ICS-Ⅱ型爲例,可用進口配套試劑,也可用自制試劑,經校正後使用,按照操作介紹進行。現以免疫球蛋白G(IgG)爲例。
①先用電腦稀釋器將待測樣本稀釋至1∶36或1∶216。
②將待測的IgG校正電腦卡及IgG的抗血清電腦卡先後插入儀器內,有關的試驗參數及標準曲線即自動記錄在微處理機中。
④用42μl加樣器將欲測定的稀釋標本和IgG抗血清分別注入反應管中,透過顯示屏,於60s內自動顯示IgG的含量。
(2)手動散射比濁測定法:由於自動試劑受到許多限制,手動操作可替代自動試劑,對於微量蛋白質測定的繼續開發是十分重要的。
①抗原製備:爲了確定抗血清的使用比例,須確定最適合的抗原含量。ICS最佳檢測範圍應是0.2~20mg/L之間,最適抗原中點濃度爲2mg/L(指反應管中的終濃度)。其計算公式爲:
稀釋倍數=
例如:參考唾液IgG值爲12g/L時代入公式則
將參考唾液用稀釋液稀釋後,備用,並以同樣方法配製其他濃度,選擇多點,製作校正曲線。該樣品應清澈透明,其本底速率值(RU)不應超過50,散射值(SU)不應超過30,才爲合用。
②抗血清製備:取特異性強。效價高的抗血清進行適當稀釋,經0.45μm微孔濾膜過濾後,選擇最適增益卡(M11、M22、M33、M44),以已知含量的參考唾液作爲標準抗原,用手動方式將ICS專用抗血清與自制抗血清對同一抗原,測其速率單位(RU)。以自制抗血清的RU除以Beckman抗血清的RU,即爲自制抗血清的稀釋倍數。
③參考曲線的製備:將已知抗原稀釋成不同濃度,分別與抗血清反應,測定的RU值爲縱座標,相應的抗原濃度爲橫座標、劃曲線求出標本含量。
④標本測定:所有體液皆可測定,一般血清標本可按反應管中最佳檢測濃度稀釋。腦脊液(CSF)可不作稀釋,直接測定,測得RU值查標準曲線所得mg數乘以稀釋倍數即爲標本測量值。
(3)手動速率散射比濁法:表1。
完成上面操作後,即完成一次樣品測定,另測標本時再重複6~10步驟操作。取得的速率值查校正曲線,即得未知標本濃度。
4.7 正常值
4.8 化驗結果臨牀意義
(1)有助於釉質表面完整性的維持;
(2)抑制真菌生長及芽生胞子的產生,從而干擾其在口腔的定居;
(3)低pH、營養缺乏、低離子濃度環境中富組蛋白抗菌效力更強,對某些鏈球菌有明顯的凝聚作用,因此其在清除口腔致齲菌方面有着重要作用;
(4)富組蛋白在齲病、口腔黏膜病、牙周病的發生發展中均有重要的預防作用。
4.9 附註
口服避孕藥可使結果降低。
4.10 相關疾病
齲