4 尿多巴胺的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 化驗取材
4.4 尿多巴胺的測定原理
樣品中的兒茶酚胺在pH 8.0~8.5時,經氧化鋁吸附、提純,再用酸性溶液洗脫,然後在pH 6.0~6.5的緩衝液中進行氧化,以鹼性抗壞血酸還原成具有強烈熒光的1-甲基3,5,6-三羥吲哚衍生物,進行熒光測定。
4.5 試劑
(1)正丁醇(AR),需重蒸餾。
(6)1mol/L的氨水。
(9)鹼性抗壞血酸溶液:取200g/L氫氧化鈉溶液9份與20g/L抗壞血酸溶液1份混合而成,臨用前視需要量配製。
(13)活性氧化鋁(層析規格,100目):將200g氧化鋁放入1000ml 2mol/L鹽酸溶液中,加熱煮沸20~30min,同時不斷攪拌,然後用蒸餾水反覆進行洗滌,至上清液的pH值接近中性,抽氣過濾後置烤箱中,300℃活化3h。
(14)4mg/L硫酸奎寧溶液:準確稱取4mg硫酸奎寧溶於100ml 0.05mol/L硫酸溶液中,此爲貯存溶液,置冰箱備用。
取此貯存液1ml於100ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸溶液稀釋至刻度,此爲應用液,置冰箱保存。
(15)去甲腎上腺上腺上腺素標準液(1ml約含0.4μg):精確稱取20.1mg去甲腎上腺上腺上腺素酒石酸鹽,溶於0.1mol/L鹽酸中使成100ml,此即爲貯存液。置冰箱中可保存數月。臨用前取此貯存液0.4ml放入100ml容量瓶中,以0.2mol/L醋酸溶液稀釋至刻度,此爲應用液。
4.6 操作方法
(1)尿樣收集:以5ml濃鹽酸作爲防腐劑,收集24h尿樣本,充分混合後取2%尿液進行測定。
(2)水解:將尿樣置於100ml三角瓶中,以3mol/L硫酸調pH至1.5~2.0(用精密pH試紙)。瓶口覆以倒置的小漏斗,在沸水浴中加熱20min,然後置流水中冷卻。
(3)吸附與洗脫:取3g活性氧化鋁加入已水解的尿樣中,以140g/L碳酸鈉溶液慢慢滴入,並不斷攪動,調節尿樣的pH至8.2~8.4,立即將瓶置於振盪器上進行振盪吸附5min(275r/min),靜置數分鐘後傾去上清液,然後將瓶內氧化鋁混懸液傾入柱層析管中(管底填有玻璃絲或具有砂心,管徑10mm)。濾幹後,以約10ml 0.2mol/L醋酸鈉溶液清洗一次,再以重蒸餾水洗二次,每次約5ml,濾幹後加入0.2mol/L醋酸溶液進行洗脫,用帶塞刻度筒收集洗脫液50ml。
(4)正丁醇處理:以20ml正丁醇加入上述洗脫液中,倒轉振搖約2min,靜置,待溶液澄清以後,仔細將上述正丁醇吸出棄掉,即得澄清洗脫液。
(5)熒光產物的生成:取25ml三角燒瓶3只,按表1操作。
(6)熒光測定:以硫酸奎寧溶液校準熒光計至固定讀數。用405nm爲激發波長,515nm爲發射波長,讀取各瓶熒光數值。
4.7 正常值
尿1~4歲 261~1698nmol/24h;
5歲~成人 424~2612nmol/24h。
4.8 化驗結果臨牀意義
降低:見於帕金森病。
4.9 附註
HPLC法,尿液 4歲以下10~260μg/24h,4歲以上65~400μg/24h。