3 鉤端螺旋體疫苗藥典標準
3.1 品名
3.1.1 中文名
3.1.2 漢語拼音
Gouduanluoxuanti Yimiao
3.1.3 英文名
Leptospira Vaccine
3.2 定義、組成及用途
本品系用各地區主要的鉤端螺旋體流行菌型的菌株，經培養、殺菌後，製成單價或多價疫苗。用於預防鉤端螺旋體病。
3.3 1 基本要求
生產和檢定用設施、原材料及輔料、水、器具、動物等應符合“凡例”的有關要求。
3.4 2 製造
3.4.1 2.1 菌種
生產用菌種應符合“生物製品生產檢定用菌毒種管理規程”的有關規定。
3.4.1.1 2.1.1 名稱及來源
主要生產用菌種如下：
血清羣 | 血清型 | 株名 | |
犬羣 致熱羣 秋季羣 澳洲羣 波摩那羣 流感傷寒羣 七日熱羣 | 賴型 犬型 致熱型 秋季型 澳洲型 波摩那型 臨海型 七日熱型 | 賴、017、江4、70091 611、桂44 [4]、HBS5 臨4 沃34、115、620 羅、109 臨6 401、廣229、245 | 強 弱 強 強 弱 弱 強 弱 |
3.4.1.2 2.1.2 生產用菌種的建立
3.4.1.3 2.1.3 生產用菌種的檢定
生產用菌種應先通過體重120～220g的豚鼠傳代，2～3天后或豚鼠瀕死前抽取其心血或摘取肝組織，接種生產用培養基或其他適宜培養基，並培養4代以上方可進行各項檢定。
3.4.1.3.1 2.1.3.1 形態及培養特性
將菌種接種於生產用培養基，接種量在5%以下，28～32℃培養5～10天，培養物在顯微鏡下放大400倍觀察，鉤端螺旋體菌數爲每視野100條以上。培養物應透明，微帶乳光，搖動時稍有云霧狀渾濁，菌形整齊、運動良好、兩端形成鉤狀。
3.4.1.3.2 2.1.3.2 血清凝集試驗
用培養3～10天的活培養物，在顯微鏡下放大400倍觀察，鉤端螺旋體菌數爲每視野50～100條，運動良好，且無自凝，與參考血清做定量凝集反應，其凝集效價應達血清原效價之半。終點效價以菌數減少50%（++）爲判定標準。新菌種要求用凝集素交叉吸收試驗法定型。
3.4.1.3.3 2.1.3.3 毒力試驗
用體重180～220g的豚鼠6只，分成兩組，每隻豚鼠經皮下注射已培養5～10天、在顯微鏡下放大400倍觀察菌數爲每視野50～100條活的待檢培養物2ml。其中一組於注射後48小時抽取心血，按1%量接種生產培養基或其他適宜培養基2支，培養14天，鏡檢呈陽性（生長鉤端螺旋體），即屬弱毒菌株；另一組於注射後觀察10天，至少應有2只豚鼠因患鉤端螺旋體病死亡，即屬強毒菌株。
對於傳代保存的已知的弱毒或強毒株菌種，也分別按上述相應方法進行，符合弱毒株或強毒株規定者爲合格。
3.4.1.3.4 2.1.3.4 免疫力試驗
用培養5～10天的活培養物，在顯微鏡下放大400倍觀察菌數，每視野鉤端螺旋體爲70～100條，將該培養物於56～58℃加溫1小時或以3.0g/L苯酚殺菌，以生理氯化鈉溶液做3倍稀釋，取體重120～220g豚鼠3只（同時飼養3只豚鼠作爲對照組），皮下免疫2次，第1次0.5ml，第2次1ml，間隔5天，末次注射後10～12天，用同株或同型異株培養5～10天、在顯微鏡下放大400倍觀察菌數爲每視野50～100條的培養物2ml進行皮下攻擊。
強毒株：攻擊後觀察10天，免疫組豚鼠應健存，外觀及食慾正常，不聳毛，運動活潑，體重增加，解剖無黃疸。對照組豚鼠至少應有2只患鉤端螺旋體病死亡，判爲合格。
弱毒株：攻擊後，24小時抽取心血，取2管5%～8%兔血清培養基，每管4～5ml，各加1～2滴心血（約爲1%接種量）。培養14天。免疫組2/3以上爲陰性，對照組均爲陽性，判爲合格。
3.4.1.3.5 2.1.3.5 抗原性試驗
用培養5～10天的活培養物，在顯微鏡下放大400倍觀察菌數，每視野鉤端螺旋體爲70～100條，將該培養物於56～58℃加溫1小時或以3.0g/L苯酚殺菌，靜脈免疫體重2.0～2.5kg家兔3只，共注射3次，間隔5天，第1次1ml、第2次2mt、第3次5ml，末次注射後10～15天取家兔血清與同株培養物做凝集反應，至少有2只家兔血清效價達到1: 10000以上判爲合格。
3.4.1.4 2.1.4 菌種傳代及保存
3.4.1.4.1 2.1.4.1 菌種傳代
爲保存菌種的毒力及純度，每傳3～6代，應通過體重120～220g豚鼠傳代一次，並同時做血清學特性檢查和生物學特性檢查，合格方可作爲保存菌種。
3.4.1.4.2 2.1.4.2 菌種保存
菌種應保存於含兔血清培養基或其他適宜培養基內，於18～22℃避光定期傳代保存或液氮保存。
3.4.2 2.2 原液
每種血清型使用1個菌株。
3.4.2.1 2.2.1 生產用種子
生產用菌種經培養5～10天生長良好後，取2ml培養液，皮下注射體重120～220g的豚鼠，2～3天后或動物瀕死前取心血（或摘取肝組織）按不高於1%的量接種於生產用培養基或其他適宜培養基，28～32℃培育7～18天（不易生長的菌株可延至30天），經純菌試驗及血清學特性檢查合格後，再於生產用培養基或其他適宜培養基連續傳代至少4次，經檢查爲生長良好、運動活潑的純培養物方可用於大量接種。
3.4.2.2 2.2.2 生產用培養基
3.4.2.3 2.2.3 培養
採用10L大瓶或大罐通氣培養，經28～32℃培養4～14天，在顯微鏡下放大400倍觀察，菌數應達300條以上。取樣做純菌試驗及鏡檢，應無雜菌。培養物可用適宜的方法濃縮。
3.4.2.4 2.2.4 濃度測定
採用顯微鏡計數法測定菌數。
3.4.2.5 2.2.5 殺菌
培養物用苯酚（含量應不高於3.0g/L）或其他適宜殺菌劑殺菌。至少放置30分鐘，取樣鏡檢殺菌情況。大罐培養亦可先合併後殺菌。原液如放置半年以上，合併前應逐瓶做無菌檢查。
3.4.2.6 2.2.6 原液檢定
按3.1項進行。
3.4.2.7 2.2.7 原液保存
應於2～8℃保存。
3.4.3 2.3 半成品
3.4.3.1 2.3.1 配製
2.3.1.1 殺菌後的原液按預定比例將不同菌型培養物混合成1批。
2.3.1.2 疫苗所含菌型應按當地主要流行菌型配製，5價以下（含5價）者，每型含菌數應不低於1.5×108條/ml;6價（含6價）以上，每型含菌數應不低予1.0×108條/ml。各型比例不應超過或低於計算量的10%，疫苗的總菌數應不超過1.25×109條/ml。
2.3.1.3 加入氯化鈉，使其最終含量爲8.5g/L。
3.4.3.2 2.3.2 半成品檢定
按3.2項進行。
3.4.4 2.4 成品
3.4.4.1 2.4.1 分批
3.4.4.2 2.4.2 分裝
3.4.4.3 2.4.3 規格
每瓶5ml。
3.4.4.4 2.4.4 包裝
3.5 3 檢定
3.5.1 3.1 原液檢定
3.5.1.1 3.1.1 苯酚測定
應不高於3.0g/L（2010年版藥典三部附錄Ⅵ M）。
3.5.1.2 3.1.2 無菌檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A）．應符合規定。如大瓶培養應逐瓶做無菌檢查。
3.5.2 3.2 半成品檢定無菌檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A），應符合規定。若移至大瓶存放，應按前、中、後抽樣做無菌檢查。
3.5.3 3.3 成品檢定
3.5.3.1 3.3.1 鑑別試驗
採用血清凝集試驗，按疫苗所含菌型抗原的抗血清與本品做試管凝集試驗，應產生特異性凝集。
3.5.3.2 3.3.2 物理檢查
3.5.3.2.1 3.3.2.1 外觀
應爲微帶乳光的懸液，無異臭，無搖不散的凝塊及異物。
3.5.3.2.2 3.3.2.2 裝量
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅰ A），應不低於標示量。
3.5.3.3 3.3.3 化學檢定
3.5.3.3.1 3.3.3.1 pH值
應爲6.4～7.4（2010年版藥典三部附錄Ⅴ A）。
3.5.3.3.2 3.3.3.2 氯化鈉含量
應爲7.5～9.50（2010年版藥典三部附錄Ⅶ G）。
3.5.3.3.3 3.3.3.3 苯酚含量
應不高於3.0g/L（2010年版藥典三部附錄Ⅵ M）。
3.5.3.4 3.3.4 效力測定
按疫苗所含菌型價數，用生理氯化鈉溶液將本品稀釋成每型含菌數5×107條/ml，按2.1.3.4項進行。
3.5.3.5 3.3.5 無菌檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A），應符合規定。
3.5.3.6 3.3.6 異常毒性檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ F），應符合規定。
3.6 4 保存、運輸及有效期
3.7 5 使用說明
【藥品名稱】
通用名稱：鉤端螺旋體疫苗
英文名稱：Leptospira Vaccine
漢語拼音：Gouduanluoxuanti Yimiao
【成分和性狀】
本品系用各地區主要的鉤端螺旋體流行菌型的菌株，經培養殺菌後製成單價或多價疫苗。爲微帶乳光的液體，含苯酚防腐劑。
【接種對象】
流行地區7～60歲的人羣。
【作用與用途】
【規格】
每瓶5ml。
（1）上臂外側三角肌下緣附着處皮下注射。
（2）共注射2針，間隔7～10天。第1針注射0.5ml，第2針注射1.0ml。
7～13週歲用量減半。必要時7週歲以下兒童可酌量注射，但不超過成人量之1/4。
應在流行季節前完成注射。
【不良反應】
常見不良反應：
接種後可出現短暫發熱，注射部位可出現疼痛、觸痛和紅腫，多數情況2～3天內自行消退。
極罕見不良反應：
過敏性皮疹：應及時就診。
【禁忌】
（1）已知對該疫苗的任何成分過敏者。
（2）患急性疾病、嚴重慢性疾病、慢性疾病的急性發作期和發熱者。
【注意事項】
（1）以下情況者慎用：家族和個人有驚厥史者、患慢性疾病者、有癲癇史者、過敏體質者。
（2）如出現搖不散的凝塊、異物、疫苗瓶有裂紋或標籤不清者，均不得使用。
（3）疫苗開啓後應立即使用，如需放置，應置2～8℃．並於1小時內用完，剩餘均應廢棄。
（4）注射免疫球蛋白者，應至少間隔1個月以上接種本品，以免影響免疫效果。
（5）月經期婦女暫緩注射。
（6）應備有腎上腺素等藥物，以備偶有發生嚴重過敏反應時急救用。接受注射者在注射後應在現場觀察至少30分鐘。
（7）嚴禁凍結。
【貯藏】
於2～8℃避光保存和運輸。
【包裝】
【有效期】
18個月。
【執行標準】
【批准文號】
【生產企業】
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電話號碼：
傳真號碼：
網 址：
3.8 版本
《中華人民共和國藥典》2010年版