4 藥典標準
4.1 藥品名稱
4.2 拼音名
Gouduanluoxuanti Junmiao
4.3 英文名
LEPTOSPIRAL VACCINE
4.4 來源(分子式)與標準
本品系用鉤端螺旋體菌種，在適宜的培養液中培養，經苯酚殺菌後製成。按不同流 行菌型的需要，可製成各種單價或多價製品。
4.5 性狀
本品爲白色微帶乳光的液體。
4.6 檢查
照《中國生物製品規程》中鉤端螺旋體菌苗製造及檢定規程的各項規定 進行試驗，均應符合規定。
4.7 類別
生物製品。
4.8 劑量
皮下注射2 次，第一次0.5ml ，第二次1ml ，每次間隔7 日；一年後再 注射2 次，劑量同前。
4.9 貯藏
在2 ～8 ℃的暗處保存。
5 鉤端螺旋體菌苗製造及檢定規程
[1]本品系用各地區主要的鉤端螺旋體流行菌型，經培育、殺菌後，按型別配成單價或多價菌苗，用於預防鉤映螺旋體病。
5.1 菌種
1.1 菌種來源
製造菌苗用之菌種，由中國藥品生物製品檢定所分發或經同意。疫情需要時，新分離的菌種經與質量檢定部門會同檢定符合規程要求，並經中國藥品生物製品檢定所同意後方可用於生產。
1.2 菌種檢定。
生產用的菌種應通過體重120～220g的豚鼠傳代，2～3天后或瀕死前抽取心血或摘取肝組織，接種生產用養基或其他適宜的培養基，並培育傳至4代以上即可進行各項檢定。
1.2.1 培養特性
將上述菌種擱於生產培養基，接種量在5%以下，28～32℃培育5～10天，鉤端螺旋體菌數應達每視野100條/400x以上。培養物應透明，微帶乳光，搖動時稍有云霧狀混濁，菌形要求整齊，運動活潑，兩端形成鉤狀。
用3～10天的活培養物，每視野50～100條/400x，運動良好，且無自凝的鉤端螺旋體，與特異性血清做定量凝集反應，其凝集效價應達血清原效價之半。終點效價以菌數減少50%（++）爲判定標準。新菌種要求用凝集素交叉吸收試驗法定型。
1.2.3 毒力試驗
用體重180～220g的健康豚鼠6只，分成兩組，弱毒、強毒株分別各皮下注射培育5～10天，每視野50～100條/400x活培養物2ml。弱毒株注射後48小時抽取心血，按1%量接種於生產培養基或其他適宜培養基2支，培育14天，鏡檢。要求培育全部陽性，判爲合格。強毒株注射後，觀察10天，至少應有2只豚鼠因患鉤端螺旋體病死亡，判爲合格。
1.2.4 免疫力試驗
用培育5～10天每視野70～100條/400x經56～58℃加溫1小時或0.3%(ml/ml)苯酚殺死的鉤端螺旋體培養物，以生理鹽水做3倍稀釋，免疫體重120～220g健康豚鼠3只（對照組3只應同時飼養），皮下免疫2次，第1次0.5ml，第2次1ml，間隔5天，末次注射後10～12天用同株或同型異株培育5～10天每視野50～100條/400x的培養物2ml進行皮下攻擊。
強毒株：攻擊後觀察10天，免疫組豚鼠應健存，外觀及食慾正常，不聳毛，運動活潑，體重增加，解剖無黃疸。對照組豚鼠至少應有2只患鉤端螺旋體病死亡，判爲合格。
弱毒株：攻擊後，24小時抽取心血，接種2管5%～8%兔血清培養基，每管1～2滴（約爲1%接種量）。培育14天。免疫組心血培養要求2/3以上爲陰性，對照組均爲陽性，判爲合格。
1.2.5 抗原性試驗
用培育5～10天每視野70～100條/400x經56℃加溫1小時殺死的培養物，靜脈免疫體重2.0～2.5kg的健康家兔3只，各按1ml、2ml與5ml，共注射3次，間隔5天，末次注射10～15天取家兔血清與同株培養物作凝集反應，至少應有2只家兔血清效價達到1∶10000以上判爲合格。
1.3 菌各保存
1.3.1 鉤端螺旋體菌種應保存於含兔血清培養基或其他適宜培養基內，存放在18～22℃暗處，定期傳代保存或液氮保存。
1.3.2 爲保存菌種的毒力及純度，每傳3～6代，應通過體重120～220g健康豚鼠一次，並同時做血清學特性檢查。
5.2 菌苗製造
2.1 菌種
用體重120～220g的健康豚鼠，皮下注射培育5～10天生長良好的種子培養物2ml，注射後2～3天或瀕死前抽取心血或摘取肝組織，按1%以下量接種於生產用培養基或其他適宜的培養基，28～32℃培育7～18天，個別不易生長的菌種可延至30天，經檢查爲生長良好，運動活潑的純培養，方可用於大量接種。此外洗種法也可使用。液氮保存菌種復甦後即可用於生產。
第1代菌種須做純菌試驗及血清學特性檢查。前5代接種量均不應超過10%。
製造菌苗所用之菌種不應低於4代（洗種法除外），最多不超過菌種檢定許可的代數（從感染動物或復甦後接種第1代算起）。
2.2 培育
2.2.1 生產用培養基可用綜合或半綜合培養基。用10L大瓶或大罐通氣培養時，經28～32℃培育5～14天，菌數應達300條/400x以上。取樣作純菌試驗及鏡檢，應無雜菌。培養物可用適當的方法濃縮。
2.2.2 培養物用苯酚或其他適宜殺菌劑殺菌。苯酚含量爲0.25%～0.35%(g/ml)。
2.2.3 加苯酚的菌液於配合後，混勻，至少放置30分鐘，取樣鏡檢菌體滅活情況，測苯酚含量。
大瓶培養應逐瓶做無菌試驗。
2.3 菌苗配製
2.3.1 殺菌後，按預定比例將不同菌型培養物混合成1批。大罐培養亦可先合併後殺菌。若移至大瓶存放，應按前、中、後抽樣做無菌試驗。菌液如放置放半年以上。合併前應逐瓶重做無菌試驗。
2.3.2 菌苗所含菌型應按當地主要流行菌型配合，5價以下（含5價）者，每型含菌數不低於1.5億條/ml，各型配合比例，不應超過或低於計算量的10%。六價以上菌苗，每型含菌數不應低於1億條/m.l，但菌苗的總菌數不應超過12.5億條/ml。
2.3.3 菌苗中應加氯化鈉，使其最後含量爲0.75%～0.9%(g/ml)。
2.4 菌苗分批
同日合併的菌苗作爲1批。大罐混合者，每罐作爲1批，並按分裝機分爲亞批。
2.5 分裝
5.3 成品檢定
應爲微帶乳光的液體，不應變色，無異臭，無搖不散的凝塊及異物。PH值應爲6.4～7.4。氯化鈉含量應爲0.75%～0.9%（g/ml）。苯酚含量不超過0.25%～0.35%(g/ml)。
3.2 無菌試驗
按《生物製品無菌試驗規程》進行。
3.3 安全試驗
3.3.1 防腐劑試驗
用體重18～20g健康小白鼠2只，各皮下注射0.5ml，注射後戰慄不得超過半小時，觀察7天，應活存。局部不得有膿腫或壞死。
3.3.2 毒性試驗
用體重18～20g之健康小白鼠5只，每隻腹腔注射菌苗0.5ml，或用體重350～450g之健康豚鼠2只，腹腔注射菌苗0.5ml，觀察7日，應無死亡。
3.4 免疫力試驗
按成品菌苗所含菌型價數檢定，用生理鹽水將菌苗稀成每型含菌數0.5億條/ml。每生產年度生產前3批均勻應做免疫力試驗，以後每5批至少抽檢1批。試驗方法與判定標準同1.2.4項。
3.5 鑑別試驗
採用反向間接炭凝集試驗，按成品菌苗所含菌型價數與相應炭血清做炭凝集試驗，應產生特異性凝集。
5.4 保存與效期
6 鉤端螺旋體菌苗使用說明書
本品系用不同型別之鉤端螺旋體菌株分別培育殺菌後，按各地流行菌型配成單價或多價菌苗。用於預防鉤端螺旋體病。
本品爲白色微帶乳光的液體，含苯酚防腐劑，不應有搖不散的凝塊及異物。
6.1 接種對象
流行地區7至60歲的人羣。應在流行季節前完成注射。
6.2 用法
2.劑量：第1針0.5ml，第2針1.0ml，間隔7～10天。7～13週歲用量減半。必要時，7週歲以下兒童酌量注射，但不超過成人量之1/4。
6.3 禁忌
1.發熱，急性傳染病，嚴重心臟病，高血壓，肝、腎臟病，神經和精神疾病。
2.孕婦，哺乳期婦女。
3.有過敏史者。
4.月經期暫緩注射。
6.4 反應
6.5 注意事項
1.安瓿內有搖不散的凝塊、異物或菌苗變色，曾經凍結，安瓿有裂紋等均不能使用。
6.6 保存
保存於2～8℃暗處。
7 參考資料
- ^ [1] ．"《中國生物製品規程》"．