3 門冬酰胺酶（埃希）藥典標準
3.1 品名
3.1.1 中文名
3.1.2 漢語拼音
Mendongxian'anmei （Aixi）
3.1.3 英文名
Asparaginase （Escherichia）
3.2 來源含量
本品系自大腸埃希菌（E．coli AS 1.357）中提取製備的具有酰胺基水解作用的酶。每1mg蛋白含門冬酰胺酶的活力不得低於250單位。
3.3 性狀
本品爲白色結晶性粉末；無臭，無味。
3.4 鑑別
（1）取本品5mg，加水1ml使溶解，加20%氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，再加1%硫酸銅溶液1滴，搖勻，溶液應顯藍紫色。
（2）取本品適量，加流動相A溶解並製成每1ml中約含1mg的溶液，作爲供試品溶液；另取門冬酰胺酶（埃希）對照品，加流動相A溶解並製成每1ml中約含1mg的溶液，作爲對照品溶液。照高效液相色譜法（2010年版藥典二部附錄Ⅴ D）測定，以八烷基鍵合硅膠爲填充劑（4.6mm×250mm），以0.05%三氟醋酸溶液爲流動相A，三氟醋酸-40%乙腈溶液（0.5：1000）爲流動相B；柱溫40℃，流速爲每分鐘1ml；檢測波長爲220nm；按下表進行梯度洗脫。取供試品溶液和對照品溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖中主峯的保留時間應與對照品溶液主峯的保留時間一致。
時間（分鐘） | 流動相A（%） | 流動相B（%） |
0 | 25 | 75 |
60 | 0 | 100 |
70 | 0 | 100 |
72 | 25 | 75 |
82 | 25 | 75 |
3.5 檢查
3.5.1 酸鹼度
取本品，加水溶解並製成每1ml中含10mg的溶液，依法測定（2010年版藥典二部附錄Ⅵ H），pH值應爲6.5～7.5。
3.5.2 溶液的澄清度與顏色
取本品，加水溶解並製成每1ml中含5mg的溶液，依法測定（2010年版藥典二部附錄Ⅸ A和2010年版藥典二部附錄Ⅸ B），溶液應澄清無色。
3.5.3 純度
取本品適量，加流動相溶解並製成每1ml中約含2mg的溶液，作爲供試品溶液。照分子排阻色譜法（2010年版藥典二部附錄Ⅴ H）測定，以適合分離分子量爲10000～500000球狀蛋白的色譜用親水改性硅膠爲填充劑[1]，以0.1mol/L磷酸鹽緩衝液（pH 6.7）（磷酸二氫鈉6.0g，磷酸氫二鈉20.2g，加水900ml，用磷酸或氫氧化鈉溶液調節pH值至6.7，加水至1000ml）爲流動相，流速爲每分鐘0.6ml，檢測波長爲280nm。取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按峯面積歸一化法計算主峯相對百分含量，應不得低於97.0%。
3.5.4 乾燥失重
取本品0.1g，置105℃乾燥3小時，減失重量不得過5.0%（2010年版藥典二部附錄Ⅷ L）。
3.5.5 重金屬
取本品0.5g，依法檢查（2010年版藥典二部附錄Ⅷ H第二法），含重金屬不得過百萬分之二十。
3.5.6 異常毒性
取本品，加氯化鈉注射液製成每1ml中含44000單位的溶液，取體重20g±1g的雄性小白鼠5只，分別自尾靜脈注射0.5ml，給藥後30分鐘內不得出現呼吸困難、抽搐症狀。
3.5.7 細菌內毒素
取本品，依法檢查（2010年版藥典二部附錄Ⅺ E），每1單位門冬酰胺酶（埃希）中含內毒素的量應小於0.015EU。
3.5.8 降壓物質
取本品，依法檢查（2010年版藥典二部附錄Ⅺ G），劑量按貓體重每1kg注射1萬單位，應符合規定。
3.6 效價測定
3.6.1 酶活力
3.6.1.1 對照品溶液的製備
取經105℃乾燥至恆重的硫酸銨適量，精密稱定，加水溶解並定量稀釋製成0.0015mol/L的溶液。
3.6.1.2 供試品溶液的製備
取本品約0.1g，精密稱定，加磷酸鹽緩衝液（取0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液適量，用0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液調節pH值至8.0）溶解並定量稀釋製成每1ml中約含門冬酰胺酶（埃希）5單位的溶液。
3.6.1.3 測定法
取試管3支（14cm×1.2cm），各加入用上述磷酸鹽緩衝液配製的0.33%門冬酰胺溶液1.9ml，於37℃水浴中預熱3分鐘，分別於第一管（t0）中加入25%三氯醋酸溶液0.5ml，第2、3管（t）中各精密加入供試品溶液0.1ml，置37℃水浴中，準確反應15分鐘，立即於第一管（t0）中精密加入供試品溶液0.1ml，第2、3管（t）中各加入25%三氯醋酸溶液0.5ml，搖勻，分別作爲空白反應液（t0）和反應液（t）。精密量取t0、t和對照品溶液各0.5ml置試管中，各加水7.0ml及碘化汞鉀溶液（取碘化汞23g、碘化鉀16g，加水至100ml，臨用前與20%氫氧化鈉溶液等體積混合）1.0ml，混勻，另取試管一支，加水7.5ml及碘化汞鉀溶液1.0ml作爲空白對照管，室溫放置15分鐘，照紫外－可見分光光度法（附錄Ⅳ A），在450nm的波長處，分別測定吸光度A0、At和AS，以At的平均值，按下式計算：
F爲對照品溶液濃度的校正值。
效價單位定義：在上述條件下，一個門冬酰胺酶單位相當於每分鐘分解門冬酰胺產生1μmol氨所需的酶量。
3.6.2 蛋白質含量
取本品約20mg，精密稱定，照蛋白質含量
測定法（2010年版藥典二部附錄Ⅶ M第一法）測定，即得。
3.6.3 比活
每1mg蛋白中含門冬酰胺酶活力的單位。
3.7 類別
抗腫瘤藥。
3.8 貯藏
3.9 製劑
3.10 版本
《中華人民共和國藥典》2010年版
4 參考資料
- ^ [1] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典：2010年版：第一增補本[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010．