1.吸附柱色譜
色譜管爲內徑均勻、下端縮口的硬質玻璃管,下端用棉花或玻璃纖維塞住,管內裝入吸附劑。吸附劑的顆粒應儘可能保持大小均勻,以保證良好的分離效果。除另有規定外,通常多采用直徑爲0.07~0.15mm的顆粒。色譜柱的大小,吸附劑的品種和用量,以及洗脫時的流速,均按各品種項下的規定。
(1) 吸附劑的填裝
①幹法
將吸附劑一次加入色譜管,振動管壁使其均勻下沉,然後沿管壁緩緩加入洗脫劑;或在色譜管下端出口處聯接活塞,加入適量的洗脫劑,旋開活塞使洗脫劑緩緩滴出,然後自管頂緩緩加入吸附劑,使其均勻地潤溼下沉,在管內形成鬆緊適度的吸附層。操作過程中應保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面。
②溼法
將吸附劑與洗脫劑混合,攪拌除去空氣泡,徐徐傾入色譜管中,然後加入洗脫劑將附着管壁的吸附劑洗下,使色譜柱面平整。
俟填裝吸附劑所用洗脫劑從色譜柱自然流下,液麪和柱表面相平時,即加供試品溶液。
(2) 供試品的加入
除另有規定外,將供試品溶於開始洗脫時使用的洗脫劑中,再沿色譜管壁緩緩加入,注意勿使吸附劑翻起。或將供試品溶於適當的溶劑中,與少量吸附劑混勻,再使溶劑揮發去盡使呈鬆散狀,加在已製備好的色譜柱上面。如供試品在常用溶劑中不溶,可將供試品與適量的吸附劑在乳鉢中研磨混勻後加入。
(3) 洗脫
除另有規定外,通常按洗脫劑洗脫能力大小遞增變換洗脫劑的品種和比例,分別分部收集流出液,至流出液中所含成分顯著減少或不再含有時,再改變洗脫劑的品種和比例。操作過程中應保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面。
2.分配柱色譜
方法和吸附柱色譜基本一致。裝柱前,先將載體和固定液混合,然後分次移入色譜管中並用帶有平面的玻棒壓緊;供試品可溶於固定液,混以少量載體,加在預製好的色譜柱上端。
洗脫劑需先加固定液混合使之飽和,以避免洗脫過程中兩相分配的改變。