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噬菌體表面呈現抗人紅細胞血型A抗原單鏈抗體的研究
...50A雜交瘤細胞中分離、構建單鏈抗體基因,並將其克隆入噬粒pCANTAB5E中,轉化E.coliXL-Blue,輔助噬菌體援救構建50A噬菌體單鏈抗體庫;採用完整紅細胞親和富集法淘選陽性重組噬菌體,鑑定重組噬菌體並進行序列測定分析;免疫...
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識別胸腺髓質上皮細胞和胸腺樹突狀細胞的單鏈抗體的篩選
...苄青黴素和2%葡萄糖的2YT培養基中,過夜培養擴增後提取噬粒(phagemid)。取1μl噬粒轉化30μl大腸桿菌SF110,加入500μlSOC培養基在37℃孵育1h以恢復氨苄抗性,取100μl接種到25ml含0.1%葡萄糖及100μg/ml氨苄青黴素的LB培養基中,於30℃搖牀...
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抗胃癌鼠單抗3H11Fab段載體的構建、表達及抗體活性檢測
...室研製〔3〕,爲IgG2b亞類;Fab表達載體p3MH由本室改建自噬粒載體pCOMB3H;大腸桿菌菌株TG1、XL1-blue爲本室保存;Tag酶購自Finnzymes公司;限制性內切酶購自Promega公司;HRP-羊抗鼠IgGFab購自Pierce公司。 2.PCR引物 (1)通用引物設計...
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分子雜交技術
...序列合成單鏈DNA探針合成單鏈DNA探針可將模板序列克隆到噬粒或M13噬菌體載體中,以此爲模板,以特定的通用引物或以人工合成的寡合苷酸爲引物,在[a-32P]-dNTP的存在下,由Klenow片段作用合成放射標記探針,反應完畢後得到部分雙鏈...
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免疫PCR(ImmunoPCR,Im-PCR)
...分。 四、製作方法 (一)製備生物素化DNA 將噬粒BLuescriptskt,用生物素標記的M13引物進行PCR擴增製備出含T3和T7引物序列的280bpDNA片段,即爲生物素化DNA。 (二)免疫PCR模式 1試劑 包被緩衝液:20mmol/LTris-HCI...
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噬菌體呈現技術在人抗體庫中的研究策略
...抗體基因,經過隨機重排組合將這些基因插入到噬菌體或噬粒表達載體多克隆位點中,所克隆進載體中的重、輕鏈基因間的配對也存在着很大的隨機性,這就進一步豐富了抗體庫的內涵,增加了抗體庫的多樣性。 2.3 表達人...