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基因分離克隆的方法
1基因芯片技術分離目的基因 生物芯片是高密度固定在固相支持介質上的生物信息分子的微列陣。列陣中每個分子的序列及位置都是已知的,並按預先設定好的順序點陣。基因芯片是生物芯片的一種,其上固定的是覈算類物...
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第四節 目的基因序列的來源和分離
第四節 目的基因序列的來源和分離 一、基因組DNA文庫 從生物組織細胞提取出全部DNA,用物理方法(超聲波、攪拌剪力等)或酶法(限制性核酸內切酶的不完全酶解)將DNA降解成預期大小的片段,然後將這些片段與適當...
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第六節 目的基因序列克隆的篩選與鑑定
第六節 目的基因序列克隆的篩選與鑑定 目的序列與載體DNA正確連接的效率、重組導入細胞的效率都不是百分之百的,因而最後生長繁殖出來的細胞並不同都帶有目的序列。一般一個載體只攜帶某一段外源DNA,一個細胞只接...
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分子生物學名詞解釋薈萃
...控機制)。14.DNA的體外重組:DNA的體外重組是指含有特異目的基因的DNA片段與載體DNA在試管內連接的過程。常用的方法:1.粘性末端連接法;2.平末端連接法;3.結尾法;4.人工接頭法(linker)。15.限制性核酸內切酶(restrictionendonuc...
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人皰疹病毒6型101K被膜蛋白主要抗原決定簇區原核表達克隆的構建和表達
...測序,與GenBank中HHV6標準毒株序列比較以進一步鑑定。目的基因及表達載體pThioHisA分別經雙酶切後連接,轉化宿主菌E.coliBL21,應用PCR法及限制性核酸內切酶雙重鑑定原核表達質粒,並經測序證實。IPTG誘導蛋白表達,SDSPAGE電...
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中國研究者探討了石蠟包埋口腔白斑組織檢測目的基因的方法
...者探索了在石蠟包埋的口腔白斑組織中高效、快捷地檢測目的基因的方法。研究者採用25例10%福爾馬林固定、石蠟包埋的口腔白斑組織,比較顯微解剖-巢式PCR法、蛋白酶K消化-PCR法與傳統酚氯仿抽提-PCR法3種方法,檢測共濟失調...
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中國研究者探討了石蠟包埋口腔白斑組織檢測目的基因的方法
...者探索了在石蠟包埋的口腔白斑組織中高效、快捷地檢測目的基因的方法。研究者採用25例10%福爾馬林固定、石蠟包埋的口腔白斑組織,比較顯微解剖-巢式PCR法、蛋白酶K消化-PCR法與作者:
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西醫外科第6版教材新增知識點
...引物。(3)常用PCR技術利用PCR技術,在適當條件下擴增目的基因,然後分析PCR產物,便可判斷其是否爲致病基因及其變異性質。PCR技術具有快速、靈敏、特異性高等特點,爲擴大其應用範圍,根據需要目前已衍行和發展出以下...
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分子生物學實驗基礎知識
...子結構完全相同的基因。使需要分析研究的微量、混雜的目的基因易於純化,得以增量,便於分析。 外來基因引起細胞生物性狀改變的過程叫轉化(transformation),以噬菌體把外源基因導入細菌的過程叫轉染(transfection)。...
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第二節 分子生物學實驗基礎
...子結構完全相同的基因。使需要分析研究的微量、混雜的目的基因易於純化,得以增量,便於分析。 外來基因引起細胞生物性狀改變的過程叫轉化(transformation),以噬菌體把外源基因導入細菌的過程叫轉染(transfection)。...
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基因治療技術與組織修復的基因治療
...考慮,進行基因治療有兩種方法,一是體內法,即將載有目的基因的載體直接注入受損創面,從而將目的基因整合到基因組上,提高生長因子等促創面癒合因子的分泌。然而該方法具有一些明顯的不足,首先是被轉染的細胞特異...
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一種構建人工miRNA載體的新策略
...要獲得該基因的功能缺失突變體或者通過RNAi技術抑制該目的基因的表達。由於目前公用突變體庫只有少量模式植物的突變體,因此通過RNAi技術來抑制目的基因的表達水平來探討該基因的生物學功能,是反向遺傳學研究常用的關...
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陰莖勃起功能障礙的基因治療
...Western和Southernblotting印跡技術及多聚酶鏈反應(PCR),使目的基因及基因產物能夠被識別、分離、測系、合成、克隆及體外表達,從而準確地推測出單個基因在細胞內所起的作用。雖然陽萎是否存在遺傳學缺陷缺乏足夠證據,但...
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版納園研究揭示一種構建人工miRNA載體的新策略
...要獲得該基因的功能缺失突變體或者通過RNAi技術抑制該目的基因的表達。由於目前公用突變體庫只有少量模式植物的突變體,因此通過RNAi技術來抑制目的基因的表達水平來探討該基因的生物學功能,是反向遺傳學研究常用的關...
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受體介導基因轉移的策略研究與進展
...關鍵詞受體介導;基因轉移 受體介導的基因轉移是將目的基因與配體連接,通過配體與細胞表面的特異性受體結合,以受體介導的內吞作用將目的基因轉入細胞。配體與受體的特異性結合以及受體介導的內吞作用是一種生理...
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基因工程技術在製藥領域的應用前景及產業化趨勢
...一是取得符合人們的要求的DNA片段,這種DNA片段被稱爲“目的基因”;二是將目的基因與質粒或病毒DNA連接成重組DNA(質粒和病毒DNA稱作載體);三是把重組DNA引入某種細胞(稱爲受體細胞);四是把目的基因能表達的受體細胞...
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惡性腫瘤的基因治療
...病率,患惡性腫瘤的人數遠多於遺傳病的患者。 外源目的基因的選擇不侷限於有缺陷的或病變的基因,只要能達到治療腫瘤的目的而對正常體細胞無害的基因均可以採用,外源目的基因的選擇餘地增大。 腫瘤的基因治療...
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菌落PCR和質粒PCR對轉化菌的篩選
...(LacZfor和LacZback),用克隆載體轉染菌的篩選與鑑定。採用目的基因5‘端和3‘端特異性引物,用於表達載體轉染菌的篩選和鑑定。並將9株抗不同抗原單克隆抗體可變區基因120個陽性質粒PCR和菌落PCR產物作爲DNA測序模板,進行自動...
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第三節 基因治療
...常基因或有治療作用的核酸片段。選擇高效的載體系統與目的基因重組。選擇適當的受體細胞,接受正常基因並回輸到患者體內適度表達,發揮特定的治療作用。 反義技術基因治療是利用反義核酸細胞作用,導入細胞內抑制...
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逆轉錄病毒載體介導的人白細胞介素10在大鼠心肌細胞的表達
...性培養基培養;3d後取細胞分別提取DNA和RNA。 1.2.3 目的基因hIL-10在大鼠心肌細胞表達的檢測 1.2.3.1 目的基因hIL-10轉移至大鼠心肌細胞的檢測 取上述轉染的大鼠心肌細胞,PBS離心洗滌3次,按文獻[8]的方法提取DNA作PC...
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第五節 變異在醫學中的實際應用
...遺傳工程方面的應用 遺傳工程的目的是人工對所需的目的基因進行分離剪裁,然後將目的基因與載體結合後,導入宿主細胞或細菌進行擴增獲得大量的目的基因,或通過宿主表達獲得所需的基因產物。質粒與噬菌體都是較理...
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重組狂犬病毒在原核細胞中的表達
...他試劑購於華美生物工程公司。 1.2 方法 1.2.1 目的基因克隆及重組 以狂犬病毒全基因及IL-2全基因文庫設計特異性引物,以狂犬病毒cDNA和IL-2cDNA爲模板,經PCR擴增,調出目的基因,於T載體中克隆,獲得足夠量基因片...
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腮腺炎病毒疫苗株與野毒株的部分核苷酸序列分析
...PCR產物進行測序。結果 傳代之前第5代的兩種疫苗株的目的基因的核苷酸序列完全一致;傳至第25代的S79株的目的基因的核苷酸序列比25代的JerylLynn株顯示了更高的突變率。比較現行疫苗株與野毒株的核苷酸序列後發現,1995年分...
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人基因治療研究和製劑質量控制技術指導原則
...(一)DNA重組體或基因導入系統的構建 1.治療用的目的基因 詳細說明基因治療所用的目的基因及其來源(尤其是有否涉及國內外專利問題,應有專利查詢資料),獲得目的基因的材料方法和基因鑑定結果。 2.載體...
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第八節 DNA重組及基因工程技術對醫學和生命科學發展的貢獻
... 近年來轉基因動物技術又有新的發展。ES細胞導入與目的基因同源的序列,則在體內可以經同源重組使用的基因發生突變,這樣成長起來的動物有目的基因的缺陷,這種技術稱爲基因打靶(genetargetting)。用基因打靶可以在...
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葡萄糖激酶基因重組逆轉錄病毒的構建及鑑定
...GK基因逆轉錄病毒表達載體PLX-GK,經酶切及序列分析證實目的基因插入位點和讀碼框架正確、無突變;建立了穩定產毒細胞系PA317/GK,其培養上清平均病毒滴度爲6.8×105cfu/ml,最高爲1.8×106cfu/ml,PCR及免疫組化證實GK基因整合入PA317/G...
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基因治創傷性骨關節病前景看好
...骨關節病,是國際上的一個研究熱點。這種治療是將相關目的基因轉移到關節滑膜或軟骨細胞中,從而抑制軟骨損壞、增加軟骨合成。對目的基因的選擇和表達調控以及對“運送”目的基因的載體的研究都還有待進一步深入。 ...
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鉤端螺旋體Lipl21基因真核質粒構建及在HeLa細胞的表達
...重組體pcDNA3.1(+)/LipL21轉染入HeLa細胞,免疫組化法觀察目的基因的表達。結果雙酶切及測序鑑定證明成功構建LipL21真核表達重組體pcDNA3.1(+)/LipL21,DNA測序顯示重組質粒含有561bp的目的基因片段,讀碼框架正確,無鹼基錯配及...
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轉基因天山雪蓮新品種實現快速大量獲取
...特的優勢。此次研究人員發明的分子育種方法,是將攜帶目的基因的表達載體轉化農桿菌,將此農桿菌與通過植物組織培養技術培養的天山雪蓮外植體共培養,使目的基因插入到外植體基因組中,經抗性素篩選,再通過分子檢測...
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第二節 基因治療
...正或置換致病基因的一種治療方法。在這種治療方法中,目的基因被導入到靶細胞(targetcells)內,他們或與宿主細胞(hostcell)染色體整合成爲宿主遺傳物質的一部分,或不與染色體整合而位於染色體外,但都能在細胞中得到...