3 概述
在纖溶酶的作用下,纖維蛋白(原)可以降解產生不同分子量的碎片X、Y、D,E以及其他一些碎片,總稱爲纖維蛋白(原)降解產物(FDP)。測定血漿(或尿液)中FDP含量的試驗通常有免疫電泳法、免疫擴散法、絮狀沉澱法、乳膠凝集(Fi)試驗、紅細胞凝集抑制試驗、葡萄球菌聚集試驗、反向血凝試驗以及酶聯免疫吸附試驗等等。本節僅介紹臨牀上常用的反向血凝試驗和葡萄球菌聚集試驗。
4 纖維蛋白降解產物的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 纖維蛋白降解產物的測定原理
(1)反向血凝試驗:以抗纖維蛋白原抗體致敏紅細胞來測定相應的抗原。致敏紅細胞上載有抗纖維蛋白原抗體,如受檢血清中含有與纖維蛋白原共同抗原決定簇的FDP類物質,則紅細胞所載的抗纖維蛋血原抗體將與之結合,紅細胞發生聚集。
(2)葡萄球菌聚集試驗:纖維蛋白原和纖維蛋白(原)降解產物可使某些凝固酶陰性的金黃色葡萄球菌聚集,故將此種菌株與被檢血清混合,若引起細菌聚集,則表明血清中有纖維蛋白降解產物存在。
4.5 試劑
(1)反向血凝試驗:
①致敏紅細胞。
②標準纖維蛋白原。
③生理鹽水。
4.6 操作方法
(1)反向血凝試驗:
②“V”型孔塑料板,第1孔開始直至第12孔,每孔加生理鹽水25μl。
③第1孔加受檢血清25μl,從第2孔開始依次作倍比稀釋。
④每孔致敏紅細胞加25μl。以後步驟同標準曲線製備。
⑤標準曲線製備:
B.在“V”型孔塑料板上,從第2孔開始依次每孔加生理鹽水25μl。
C.將稀釋的纖維蛋白原溶液,第1、2孔各加25μl,並從第2孔開始依次作倍比稀釋至0.078mg/L。
D.取1支致敏紅細胞,用生理鹽水1ml作成懸液,每孔加25μl。
E.置微型振盪器,振動30s,放置37℃,溫育30min。
F.室溫下放20min,觀察結果。
⑥計算:
A.標準計算:纖維蛋白原稀釋濃度爲10、5、2.5……0.0078mg/L,致敏紅細胞出現無凝聚現象的前一個孔作反應終點。如第7孔爲終點,即抗體的敏感性所能檢測纖維蛋白原爲0.15625mg/L。
B.標本計算:找出凝集的終點,算出稀釋倍數,再將0.15625mg/L乘稀釋倍數。
①玻片法:吸取菌液應用液0.05ml,被檢血清0.05ml,在玻片上混勻,室溫下將玻片搖動2min,觀察細菌有無聚集現象。有聚集者爲陽性,無聚集者爲陰性。同時以生理鹽水0.05ml代替血清作對照。
②試管法:取被檢血清0.1ml,以生理鹽水作倍比稀釋,然後在每管中加入新鮮配製的菌液應用液0.05ml,搖盪200次/min共2min,立即在每管中加入生理鹽水0.5ml,於室溫中靜置30min,觀察結果。並與對照管比較,如有明顯細菌聚集,以發生聚集之最後一管作爲反應終點。
4.7 正常值
(1)反向血凝試驗:小於10mg/L。
(2)葡萄球菌聚集試驗:玻片法爲陰性;試管法爲0~2mg/L。
4.8 化驗結果臨牀意義
(1)反向血凝試驗:FDP含量增高,見於原發性和繼發性纖溶亢進。
4.9 附註
(1)反向血凝試驗:
③同一批致敏紅細胞存放時間過久,抗體效價可能降低,則須每月定標1次。
②因胸水、腹水等標本含纖維蛋白原,故在檢測前加等量凝血酶(10u/ml),置37℃溫育30min,離心,取上清液試驗。