3 概述
淋巴細胞脈絡叢腦膜炎(lymphocytic choriomeningitis,LCM)系LCM病毒所致的急性傳染病,其臨牀經過可有流行性感冒樣症狀至腦膜炎、腦炎等程度不等的表現。本節主要介紹LCM病毒的實驗室診斷。
7 淋巴細胞脈絡叢腦膜炎補體結合試驗的原理
補體結合試驗法:抗原抗體複合物可以結合補體,這是補體結合試驗的依據。綿羊紅細胞和其相應抗體(溶血素)的複合物結合補體後出現溶血現象。因此,綿羊紅細胞和溶血素被作爲補體結合試驗中判斷待測系統中有無抗原抗體反應的複合物系統。如待測系統產生抗原抗體複合物,則可結合一定量補體,此時加入溶血系統則不出現溶血。如待測系統中只有抗原或抗體,不能結合補體,加入溶血系統則與遊離補體結合而發生溶血,這就是補體結合試驗的基本原理。
8 試劑
(1)巴比妥緩衝液(BBS):稱取氯化鈉85.0g,氯化鎂六水合物1.68g,氯化鈣0.28g,巴比妥5.75g,巴比妥鈉2.0g,先將巴比妥加入500ml水中加熱溶解後,再加其他成分,補加水至2000ml,此爲保留液,用時稀釋5倍。
9 操作方法
①取補體1ml,加BBS 9ml,依次稀釋成1∶20,1∶30,1∶40,1∶50,1∶60,1∶80,1∶100,1∶200,1∶400,同時取50%的溶血素0.2ml,加BBS 9.8ml,即爲1∶100的溶血素,然後繼續稀釋成1∶800,1∶1600,1∶3200,1∶6400。
②採取方陣排列試管,縱行各管加不同濃度的補體0.1ml,橫排各管加溶血素0.1ml(皆應從最高稀釋度加起)混勻後,各管加BBS 0.2ml,補體和溶血素對照管各加BBS0.3ml,最後在各管中加2%羊紅細胞0.1ml。各管總量爲0.5ml,搖勻,放37℃水箱中30min,觀察結果。茲舉一例說明(表1):
以完全溶血的補體和溶血素最高稀釋度爲各自的單位。上表(表1)中溶血素1∶3200爲一個溶血素單位,補體1∶80爲一個補體單位。在實際應用時,溶血素用2u(3200÷2=1600),補體用2.5u(80÷2.5=32)。
(2)正式試驗:
①用V型微量反應板操作,每份標本作一個試驗孔,一個血清對照孔。各孔內先加BBS 0.025ml。
②用稀釋棒蘸取血清(0.025ml)加入第一孔,旋轉後移入第二孔,共八孔,如此可得1∶2~1∶256稀釋。
③按下表(表2))加入各試劑:
(3)結果判斷:凡對照組各管的結果應符合以下情況,否則應重做。
補體對照管:2.5u=0,1u=0~±,0.5u=3~4。羊紅細胞對照管:4。抗體對照管:0。陰性對照管;1∶2~1∶256=0。陽性對照管:同一份陽性血清,每次結果應一致。
10 正常值
陰性。