核酸分子雜交促進劑

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心氣虛,則脈細;肺氣虛,則皮寒;肝氣虛,則氣少;腎氣虛,則泄利前後;脾氣虛,則飲食不入。
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1 拼音

hé suān fēn zǐ zá jiāo cù jìn jì

2 註解

核酸分子雜交促進劑

惰性多聚體可用來促進250個鹼基以上的探針的雜交率。對單鏈探針可增加3倍,而對雙鏈探針、隨機剪切或隨機引物標記的探針可增加高達100倍。而短探針不需用促進劑,因其複雜度低和分子量小,短探針本身的雜交率就高 。

硫酸葡聚糖是一種廣泛用於較長雙鏈探針雜交的促進劑。這是一種多聚胺,平均分子量爲500000。另一種常見的促進劑是聚乙二醇(PEG),PEG分子量小(6000~8000)、粘度低、價格低廉,但它不能完成取代硫酸葡聚糖。在某些條件下5%~10%硫酸葡聚糖效果較好,若用5%~10%PEG則可產生很高的本底。因此,使用促進劑時有必要優化條件。另一種多聚體促進劑是聚丙烯酸,用其鈉鹽,濃度爲2%~4%。與硫酸葡聚糖相比,其優點是價格低廉,粘度低(MW=90000)。

小分子化學試劑酚和硫氰酸胍也能促進雜交,它們可能是通過增加水的疏水性和降低雙鏈和單鏈DNA間的能量差異而發揮作用。酚作爲雜交促進劑,只能在低DNA濃度的液相雜交中觀察到,該方法曾被稱爲酚乳化復性技術,該法不能用於固相雜交,因酚可引起核酸與膜的非特異吸附作用,即使在液相雜交中的應用也是有限的。而硫氰酸胍可通過降低雙鏈DNA的Tm值而起作用。此外,該分子還可以促進RNA的雜交,有裂解細胞抑制RNase的作用。總之,硫酸葡聚糖聚乙二醇因能用於固相雜交是目前最常用的雜交促進劑。

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