4 α2-纖溶酶抑制抗原的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 α2-纖溶酶抑制抗原的測定原理
本試驗根據雙抗體夾心法原理,即將純化的t-PA單克隆抗體包被在固相載體上溫育,然後加含有抗原的待測標本。標本中的t-PA抗原與固相載體上的抗體形成複合物。此複合物與過氧化物酶標記的t-PA單克隆抗體起抗原抗體結合反應,形成t-PA-POD複合物。後者可使鄰苯二胺基質液呈棕色反應,其反應顏色深淺與標本中t-PA含量呈正比關係。
4.4 試劑
(2)過氧化物酶抗體複合物抗:t-PA-peroxidase。
(3)基質:鄰苯二胺。
(4)基質緩衝液:0.2mol/L檸檬酸,0.2mol/L檸檬酸鈉緩衝液。
(6)洗滌液:0.025mol/L氯化鈣-Tween-20-PBS緩衝液。
(9)30% H2O2。
4.5 操作方法
(3)用基質緩衝液溶解鄰苯二胺(8mg/ml),並加入10μl 30% H2O2。
(4)將t-PA標準倍比稀釋成10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125IU/ml。
(5)標本稀釋:1份檸檬酸鈉抗凝血漿加5份稀釋液。如果估計t-PA值增高,血漿作1∶10稀釋。
(6)用稀釋之t-PA抗體包被ELISA反應板,每孔200μl,溫育過夜,然後用洗滌液洗3次。
(8)加過氧化物酶抗體複合物200μl,溫育1h後,同上洗滌3次,洗後立即加基質。
(9)每孔加基質200μl,顯色10~15min。
(10)加硫酸(3mol/L)50μl或鹽酸(1mol/L)100μl,10min中止反應,於492nm,2h內比色,以稀釋緩衝液爲本底。
(11)據吸光度讀數由標準曲線查得t-PA含量。
4.6 正常值
1~12ng/ml。
4.7 化驗結果臨牀意義
(1)t-PA含量隨年齡、劇烈運動和應激反應而增高,靜脈滯留導致t-PA含量增加。
(3)高血脂、肥胖症、口服避孕藥、冠心病、心肌梗死、動脈血栓形成、缺血性中風等t-PA含量減低。
4.8 附註
ELISA法是一項特異性和敏感性較高的免疫學試驗。因此必須嚴格控制每項試驗的條件。