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第二節 反轉錄作用
...的方向相反,故稱爲反轉錄,催化此過程的DNA聚合酶叫做反轉錄酶(reversetranscriptase)。後來發現反轉錄酶不僅普遍存在於RNA病毒中,哺乳動物的胚胎細胞和正在分裂的淋巴細胞中也有反轉錄酶。 反轉錄酶的作用是以dNTP爲底物...
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RNA的提取和cDNA合成
...cDNA合成試劑已商品化。cDNA合成及克隆的基本步驟包括用反轉錄酶合成cDNA第一鏈,聚合酶合成cDNA第二鏈,加入合成接頭以及將雙鏈DNA克隆到於適當載體(噬菌體或質粒)。 一、RNA製備 模板mRNA的質量直接影響到cDNA合成的效率...
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青島科技大學DNA合成方法取得突破
...子工程學院馬翠萍課題組發現了幾種DNA聚合酶具有內在的反轉錄酶活性,突破了DNA聚合酶只能以DNA爲模板合成DNA的傳統認知,對RNA的快速檢測具有重要意義。該成果在線發表於《美國化學會志》。核糖核酸(RNA)不僅是遺傳信息...
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DNA合成方法取得突破
...子工程學院馬翠萍課題組發現了幾種DNA聚合酶具有內在的反轉錄酶活性,突破了DNA聚合酶只能以DNA爲模板合成DNA的傳統認知,對RNA的快速檢測具有重要意義。該成果在線發表於《美國化學會志》。核糖核酸(RNA)不僅是遺傳信息...
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第二十三章 DNA重組技術及其在基因診斷中的應用--第一節 工具酶
...作用在“TATAAT”(Pribnow)盒和“TTGA-CA”框附近。圖23-2反轉錄酶的作用機理 (三)反轉錄酶 反轉錄酶(Reversetranscripatase)是以RNA爲模板指導三磷酸脫氧核苷酸合成互補DNA(cDNA)的酶。哺乳類C型病毒的反轉錄酶和鼠類B...
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人免疫缺陷症1型病毒逆轉錄酶的二聚化作爲抗病毒靶點的效果
...件等需要考慮到獲得性免疫缺陷綜合徵(AIDS)的發展。HIV-1反轉錄酶(RT)的二聚體接觸點對於維持二聚體結構的穩定性和它的催化功能都起到很重要的作用,這一現象爲尋找抗HIV-1藥物的新的治療靶點起到了指導作用。目前許多已知...
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恩臨對HIV複製具有明顯抑制作用
...以上,相當於亞洲HIV人羣的50%。 作爲新一代非核苷類反轉錄酶抑制劑,恩臨對HIV複製具有明顯抑制作用,與美沙酮沒有顯著的藥物相互作用,其不良反應較其他非核苷類反轉錄酶抑制劑少見,適合於接受美沙酮維持治療的HIV...
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醫學微生物學-反轉錄病毒複習題
...構基因和調節基因E.病毒複製需依賴RNA的RNA多聚酶3.含有反轉錄酶和整合酶的病毒A.HTLVB.HAVC.登革熱病毒D.HHVE.EBV4.除哪項外,下列病毒都能通過性接觸傳播A.HIVB.HCVC.HSV-2D.HPVE.HTLV5.HIV侵犯的主要細胞是:A.T細胞B.CD8細胞C.CD4細胞D.B...
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第二節 基因治療的方法
...。 ①反轉錄病毒載體:反轉錄病毒雖是RNA病毒,但有反轉錄酶,可使RNA轉錄爲DNA,再整合到宿主細胞基因組。反轉錄病毒載體有以下的優點首先是具有穿透細胞的能力,可使近100%的受體細胞被感染,轉化細胞效率高;其次...
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艾滋病毒核酸檢測方法研究進展
...個體系裏連續反應,野生型HIV-1RNA與三種內標RNA同時擴增:反轉錄酶在一個5′端常有T7RNA聚合酶啓動子序列的引物引導下,把目標RNA序列反轉錄成單鏈DNA,然後由RnaseH把DNA/RNA雜合雙鏈的RNA降解,再由反轉錄酶在另一引物引導下合...
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中心體“RNA基因組”的重大發現
...研究人員發現其中一個片段編碼一種複製RNA有關的酶——反轉錄酶(reversetranscriptase)。這種酶可能促使中心體在形成第二個中心體時複製自己的RNA。研究人員將這些發現公佈在最新一期的《美國科學院院刊》上。細胞中其他的...
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RT-PCR法檢測MYCT-1基因在GES-1細胞中的表達
...研究所);TRIZOL試劑、1640培養基、胎牛血清(FBS)(Gibco公司);反轉錄酶、Taq酶(Promega公司);MYCT-1引物(大連寶生物公司),序列爲:正向引物:5‘-ATGGATCCCTGCACTGGCTGATGAGTGTGTA-3‘;反向引物:5‘-GTAAGCTTGAACAGTGCCTTCACCCTCGAGGT-3‘;其他試劑均爲國產...
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2001年碩士研究生入學考試西醫綜合科目試題
...用子) E.成熟過程中需進行甲基化修飾 31.下列有關反轉錄酶的敘述,錯誤的是A.反轉錄酶以mRNA爲模板,催化合成cDNAB.催化的DNA合成反應也是5’-3’合成方向 C.在催化DNA合成開始進行時不需要有引物 D.具有RNase活性...
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RT-PCR技術概述
...RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成cDNA,再以cDNA爲模板,擴增合成目的片段。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛,可用於檢測細胞中基因表達水平,細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基...
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miR21在白血病發病過程中的作用研究
...,冰浴1min,加入5×buffer4μl,0.1mol/LDTT1μl,200U/μl反轉錄酶1μl,加水至20μl,42℃,1h。最後,反轉錄酶在70℃條件下孵育15min滅活。準備cDNA擴增。1.4PCR檢測目的miRNA取上述逆轉錄得到的cDNA進行PCR擴增:①引物:上游引...
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第二十三章 基因診斷與基因治療--第一節 基因診斷
...板是待檢測核酸分子:DNA可直接用於反應,而RNA則需要用反轉錄酶反轉錄成爲cDNA,然後用作聚合酶反應的模板。反應的引物有兩條,分別位於待擴增DNA片段的兩端,可啓動相對方向的DNA合成。這樣從一個模板分子起始的話,經...
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Gilead抗HIV藥替諾福韋治療慢性乙型肝炎有效
...盟上市,適應症都是抗HIV/AIDS,該藥一天口服一次,屬於反轉錄酶抑制劑。在不遠的將來,Viread可能成爲治療慢性乙肝的重要選擇。作者:
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PCR在病毒感染的基因診斷
組織中總RNA的提取 ↓利用反轉錄酶合成cDNA ↓PCR反應:反應液組織:反應緩衝液 模板(上述合成的cDNA) 底物(dATP,dGTP,dCTP,dTTP...
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耐藥性艾滋病毒治療新藥的最新研究進展
...個抗艾滋病毒新藥後,今年將完成新一代、非核苷酸類的反轉錄酶抑制劑TMC278的臨牀研究。因而,2007-2008年將出現較多的旨在克服耐藥毒株的抗艾滋病毒新藥。作者:
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HIV的RNA酶H的小分子抑制物的設計情況
...21日CurrPharmDes.2006;12(15):1909-22.11DNA聚合酶和RNA酶H(RH)激活HIV反轉錄酶(RT)這一過程目前被普遍看作是抗逆轉錄療法的潛在位點。對於DNA聚合酶激活的藥物靶點治療已經獲得了成功,已經發現12種藥物可以對HIV感染起到很好的治療效果...
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反轉錄聚合酶鏈反應對DukesA、B期大腸癌淋巴結微轉移的檢測
...引物各0.5μl(終濃度1μM),25mMMgSO41μl(終濃度1mM),AMV反轉錄酶、TflDNA合成酶各0.5μl(終濃度0.1U/μl)和1μg總RNA,整個反應體系25μl,加樣過程在冰上進行。加樣完成後,輕微振盪混勻,放入PTC-100TM熱循環儀(MJRe-search)。首先...
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特殊細胞可在中風後保護大腦
...對Treg細胞耗盡的小鼠的缺氧缺血性大腦進行的實時定量反轉錄酶PCR考察了細胞因子的表達水平,結果顯示,炎症前體細胞因子腫瘤壞死因子-α(TNFα)、干擾素-γ(IFNγ)和白細胞介素-1β(IL-1β)的數量得到了上調。除此之外,研究人員...
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人整合素分子α4亞基片段的克隆及大腸桿菌的表達
...法 1.1 主要材料 HL-60細胞由何福初教授惠贈;M-MLV反轉錄酶、PGEM-T載體購自Promega公司;TaqDNA多聚酶、限制性內切酶EcoRI、HindⅢ、PstI、XbaI、XhoI、異硫氰酸胍購自華美公司;引物由上海生工生物工程有限公司合成;焦磷酸二...
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大鼠脊髓損傷後誘生型NOS-mRNA的表達及臨牀價值
...急性脊髓損傷模型,在損傷後2,6,12,24,48h等時段,以反轉錄酶聚合酶鏈式反應(RT-PCR)分析iNOSmRNA表達。在SCI後24h,用免疫組化方法分析iNOS在脊髓不同類型神經細胞中的表達與分佈。結果脊髓損傷後,神經元、星形細胞和小...
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第三節 RNA的複製
...RNA複製酶中缺乏校正功能,因此RNA複製時錯誤率很高,這與反轉錄酶的特點相似.RNA複製酶只對病毒本身的RNA起作用,而不會作用於宿主細胞中的RNA分子。 小結 轉錄是以DNA爲模板合成RNA的過程,經過轉錄DNA分子中的貯存信息傳...
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分子雜交技術
...生序列爲模板,用Klenow片段合成單鏈探針;(2)以RNA爲模板,用反轉錄酶合成單鏈cDNA探針。 1.從M13載體衍生序列合成單鏈DNA探針合成單鏈DNA探針可將模板序列克隆到噬粒或M13噬菌體載體中,以此爲模板,以特定的通用引物或以人工合...
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妊娠子宮肌中促腎上腺皮質激素釋放激素受體的研究
...司),dNTP、Oligo(dT)(上海生工生物工程有限公司),M-MLV反轉錄酶、TapDNA聚合酶(Promega公司),核糖核酸酶抑制劑(TaKaRa公司),Milli-Q純水製備裝置(Millipore公司),PCR儀(Eppendorf公司),DNA電泳槽(WEALTEC公司)。 1.3主要...
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深化學科交叉開發新型生物科研試劑
...熒光試劑、五色熒光DNA法醫鑑定試劑、熱啓動Taq酶、新型反轉錄酶、活性重組蛋白質、功能基因組與蛋白質科學研究關鍵試劑、國產核酸雜交探針試劑等。“新型生物科研試劑”課題共包含8個子課題,分別由6家企業承擔,開發...
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電針對力竭運動大鼠骨骼肌α-肌動蛋白基因表達的影響
...主要實驗試劑RNAisoreagent(大連takara生物工程公司);M-MLV反轉錄酶(200U/μl)(美國invitrogen公司);RNAsin(40U/μl)(美國invitrogen公司);Taq聚合酶(上海申能博彩公司);OligodT18引物(100uM)(上海申能博彩公司);α-...
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抗HIV化學藥物研發推陳出新
...顆粒釋放進入靶細胞。第二階段,HIV進入細胞後,病毒的反轉錄酶以病毒RNA爲模板,反向轉錄成雙鏈病毒DNA。第三階段,部分合成的雙鏈DNA以核酸-蛋白複合體的形式轉運到細胞核內,通過病毒的整合酶與宿主細胞DNA整合。第四...